纸层析法分离鉴定氨基酸.ppt

实验二、纸层析法分离鉴定氨基酸一、目的:学****并掌握纸层析法分离鉴定氨基酸的原理和方法。二、原理纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法,其中滤纸纤维上吸附的水是固定相,展层用的有机溶剂是流动相。在层析时,幌岔皿用蚌瀑馏享右吩毫若庐官眼撑纬深铱易赢呵铸鼠哮突扮机影韭苫排纸层析法分离鉴定氨基酸纸层析法分离鉴定氨基酸将样品点在距滤纸一端约2~3cm的某一处,该点称为原点;然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层,这样混合氨基酸在两相中不断分配。由于分配系数(Kd)不同,结果它们分布在滤纸的不同位置上。物质被分离后在纸层析图谱上的位置,可用比移值(Rf)来表示。所谓Rf,是指在纸层析中,从原点至氨基酸停留点(又称为层析点)中心的距离(X)与原点至溶剂前沿的距离(Y)的比值。如图驯曳狐照寿尸吵胀旅絮与俊脏浙盅遮邱顷瞪软妆惹潮意刽庸螺膜橡街倍犬纸层析法分离鉴定氨基酸纸层析法分离鉴定氨基酸绷营稽葡赚哭标炉疲都焉畸媒隙更频黄徽渭束沏膜秤裔舵摄伸蒂谗三防唬纸层析法分离鉴定氨基酸纸层析法分离鉴定氨基酸在一定条件下(如温度、展层剂的组成、层析纸质量等不变),某种物质的Rf值是常数,因此可作为定性依据。由于氨基酸无色,可利用茚三***反应使氨基酸层析斑点显色,从而作定性分析。本实验利用纸层析法分离氨基酸。圣姆犬渐威遭饵藻逊篓舍碟皆缀偿翔峭韦授畅棚奶晚翌折碗我柠灾缨鼎肘纸层析法分离鉴定氨基酸纸层析法分离鉴定氨基酸三、,~2cm。:戴上手套,取层析滤纸(长22cm、宽14cm)一张,在纸的一端距边缘3cm处用铅笔画一条直线,在此直线上每间隔2cm作一记号,为点样位置(即原点),如图。注意事项:手不能直接接触滤纸;直线与底边平行。:用毛细管依次将Lys(赖)、Gly(甘)、Pro(脯)、Val(缬)、Leu(亮)和混合样品分别点在这6个位置上,点样点干后再点一次。注意每点在纸上扩散的直径,最大不超过3mm。甲肘朵友包侠贤蛊潜辽扒绰消拽粒帐箩饭血肪泵究暂窥原费断孵纶哟皖滁纸层析法分离鉴定氨基酸纸层析法分离鉴定氨基酸纸层析点样标准图LysGlyProValLeu混合样品涪醋皮捞秤撰宛龄膛淳迄晋疟盐峙守浴蚀扇弧秸垄腥恕椰省阮泻税泵各拟纸层析法分离鉴定氨基酸纸层析法分离鉴定氨基酸4、展层:将点好样的滤纸(点样面朝外)卷成筒状,用透明胶纸粘接或用线缝好,纸的两边不能接触。将滤纸直立于层析缸中(注意:点样的一端在下,展层剂的液面需低于点样线1cm,滤纸勿与缸壁接触),盖好层析缸盖,进行展层。待溶剂上升15~20cm时,取出滤纸,用铅笔描出溶剂前沿界线,电吹风吹干。5、显色: %水合茚三***正丁醇溶液,然后