低频脉冲电磁场对大鼠骨髓源性内皮祖细胞增殖活性和NO分泌的影响.doc

低频脉冲电磁场对大鼠骨髓源性内皮祖细胞增殖活性和NO分泌的影响        [08-10-1314:59:00]    编辑:studa20             作者:马彦卓,许旭东,韩凯,李飞,曹艳杰,张荣庆,王海昌   【摘要】 目的:观察不同作用时间下低频脉冲电磁场对大鼠骨髓源性内皮祖细胞(EPCs):密度梯度离心法获取大鼠骨髓单个核细胞,培养4d后收集贴壁细胞,每日给予低频脉冲电磁场干预,,(0h)和磁场作用时间组(,2,4,8h组),各组细胞培养及磁场干预3d后,分别采用MTT比色法测定EPCs的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期,:对照组A490nm为(±),(±),2h组(±)与对照组(±)相比差异无统计学意义(P>);4h组A490nm值开始增加[(±)vs(±);P<],8h组较对照组增加最为明显[(±)vs(±);P<].,2h组细胞增殖指数PI(S+G2M)%与对照组相比差异无统计学意义(P>),4h组,8h组细胞增殖指数与对照组相比差异均有统计学意义(P<).NO分泌随磁场作用时间的延长,:低频脉冲电磁场可影响EPCs的增殖及NO分泌,随着作用时间的延长,细胞增殖及NO分泌增加.【关键词】 电磁场;内皮祖细胞;细胞增殖;一氧化氮 0引言内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells,EPCs)作为治疗性血管形成的研究靶点,已发现其不仅参与血管形成,也参与出生后血管生成[1].低频脉冲电磁场作为一种外来干预手段,已发现其可促进内皮细胞修复,促进内皮细胞FGF的分泌,提示低频电磁场对血管形成具有促进作用[2].我们采用体外培养大鼠骨髓EPCs,观察低频脉冲电磁场不同作用时间下骨髓EPCs增殖能力和NO分泌的变化及其时效关系,并探讨其相关作用机制,以期寻找一种新的促进血管生成的手段. 1材料和方法 ,体质量80~100g(第四军医大学实验动物中心);脉冲电磁场发生仪(第四军医大学生物医学工程系);Ficoll淋巴细胞分离液(中国医学科学院生物工程医学研究所);胎牛血清(美国Hyclone公司);血管内皮生长因子(VEGF),成纤维细胞生长因子(bFGF)(澳大利亚CYTOLAB公司);FITC标记荆豆凝集素Ⅰ(FITCUEAI,美的乙酰化低密度脂蛋白(DiIacLDL,美国MolecularProbe公司);NO试剂盒(南京建成生物工程研究所);激光共聚焦显微镜(美国BioRad公司). 、培养与鉴定[2-3]将大鼠颈椎脱臼处死后,取四肢骨用750mL/L乙醇浸泡10min,用5mL注射器抽取培养液冲洗骨髓液,密度梯度离心法获取单个核细胞,将其接种予培养瓶中,在M199培养基(含100mL/LFBS,VEGF10μg/L,bFGF5μg/L,L谷氨酰胺300mg/L,青霉