总前列腺特异抗原(tPSA).doc

总前列腺特异抗原(tPSA)化学发光法免疫测定目录号:CLIA-014用途:用微孔化学发光法免疫测定(CLIA)法对人血清中的总前列腺特异抗原进行定量测定。临床意义:前列腺特异抗原(PSA)是一种丝氨酸蛋白酶,具有胰凝乳蛋白酶样的活性。这种蛋白是一单链糖蛋白,。PSA起源于正常的前列腺,,,。原理CLIA测定前列腺特异抗原(PSA)时,采用双抗体夹心法。先将PSA标准品和稀释的病人样本分别放入微孔。再加入生物素化的单克隆抗体(前列腺特异),形成抗原抗体免疫复合物。由于链亲和素与生物素的高亲和性,生物素化的PSA抗体和PSA复合物便沉积在链亲和素包被的孔中。再加入另一标记酶的PSA特异抗体,此抗体结合到已固定于孔上的PSA,通过酶的活性,作用于底物而发出光量,由此测出发光值(RLU)。利用已知PSA活性的标准品,可以制作出酶与抗体活性的定量对应曲线。从该曲线中,根据病人样本中测出的发光值,即可找到对应的PSA活性值(ng/ml)。材料(附物品清单)A. 前列腺特异抗原(PSA)标准品,,浓度分别为0(A),5(B),10(C),25(D),50(E)和100(F)ng/. PSA示踪试剂,13ml/瓶含有酶标记和生物素化的2种单克隆鼠抗PSA抗体C. 亲和素包被的微孔板--(含有表面活性剂的Tris缓冲液),20mlE. 底物工作液A(含鲁米诺),. 底物工作液B(含过氧化氢),:保存于28°C,:已经开封的试剂最多可以在28°C下保存60天样本的收集与准备取早晨空腹静脉血,放在10ml硅化管内离心除去红细胞,收集血清。在28°C只可保存5天;在-20°C最长保存30天,避免反复冻溶。当进行双份重复测试时,。附加材料(试剂盒中未提供):µl和100µl移液器,% ,%,:(20-27°C),60分钟内用完。例如,每2个八孔条准备1ml溶液A和1ml溶液B,并混合(丢弃未使用完的溶液,不要使用看上去已经变蓝的工作底物溶液)。操作步骤在进行所有的测试前,把所有的试剂,. 合理安排微孔板中标准品、,封口后保存于at2-8°. 各吸25µ. (100µl). 轻轻晃动微