创新实验项目研究报告总结.docx

创新实验项目研究报告总结.docx:..特殊磷脂酶产生菌的筛选研究总结报告摘要:磷脂A1是专一水解天然磷脂sn一1位酰基的酶,可以得到Sn-2-基溶血磷脂和脂肪酸。磷脂酶在商业上可用于在炼油过程(油脱胶)磷脂的去除。本研究从土样采集环节即针对磷脂酸繭的特点,选择特异性生境(油菜、花生等富含脂质的根际土壤或豆腐乳等)进行土壤采集,依据细菌、放线菌、真菌的特点分别设置适宜的培养条件进行目标菌株筛选,并采用平板透明圈法以及漠甲酚紫显色法建立筛选模型,对初筛性能优秀的菌株,进行复筛。关键词:磷脂酶A1;初筛;复筛;GPC引言磷脂酶是脂肪酶的一种,同时具有脂肪酶活性和磷脂酶活性,但是在一定的反应体系中,会优先表现出一种特定的酶活,磷脂酶可以催化酯交换、酯转移、水解等反应,对磷脂的结构进行各种改变或修饰,得到不同结构和用途的磷脂,所以在油脂工业中广泛应用。磷脂酶AKPLA1,)催化磷脂第一位酯酰键的水解,生成溶血磷脂和脂肪酸,在工业上主要用于食品和非食品的磷脂乳化剂的修饰,增加汕/水混合物的乳化以及植物汕脱胶等。同传统的脱胶方法相比,酶法脱胶可大大节约化学物质的消耗量,儿乎不产牛废水,是一种经济节约、高效稳定、绿色坏保的具有国际领先水平的油脂脱胶方法。PLA1在烘焙应用中对于提高生面团或烘焙产品质量特别冇川。此外,PLA1水解卵磷脂的产物廿油磷酸胆碱具冇调节多种细胞机制的生理功能,因而引起人们特殊的研究兴趣。本研究从土样采集环节即针対磷脂陆陆的特点,选择特界性生境(人豆、汕菜、花生等富含脂质的根际土壤或炼汕厂周边的土壤)进行土壤采集,依据细菌、放线菌、真菌的特点分别设置适宜的培养条件进行目标菌株筛选,并采用平板透明圈法以及混甲酚紫显色法建立筛选模型,对初筛性能优秀的菌株,模拟实际生产过程,用非水相反应体系进行复筛。1•土样的采取针对磷脂酶的特点,为了提高获得磷脂酶的可能性,我们组采用的是花生地,菜园地,汕菜地的土壤以及豆腐乳來做筛选。以下是我们组做过的土壤及数量:花生地土壤一份菜园地土壤两份汕菜地土壤两份(混合在一起做的)(分离细菌:加入放线菌***以抑制真菌生长):(w/v)%,%,%,%,;高氏一号(分离放线菌:加入放线菌***以抑制真菌牛长):(w/v)%,K2HP04・%,%,MgS04・%,FeS04・%,%,;PDA(分离真菌:加入青霉素以抑制细菌生长):(w/v)%,%,%;(注:因为土豆培养基的制备比较麻烦,后面我们使用的是买來的孟加拉红培养基),导致分离困难;并口初次实验没有经验,分离的菌株没有保存。放线菌27株真菌19株菜园地土壤I(细菌)51株文献表明产生菌多为细菌,并且我们操作还不够娴熟,所以只分离了细菌土壤【I(细菌)49株油菜地细菌32株3刀份采取的土壤,天气还比较寒冷,所以菌的数量比较少;真菌儿乎没有放线菌17株真菌13株豆腐乳(三块)细菌3株豆腐乳只长出了细菌,并且细菌的形态都一样,(原培养基的碳源和氮源均改为大豆卵磷脂),培养基配方如下:细菌筛选培养基:(w/v)%,%,K2HP04・%,MgS04・%,%,;放线菌筛选培养基:(w/v)%,%,K2HP04•%,%,MgS04・%,FeS04・%,,%,;真菌筛选培养基:(w/v)%,(NH4)%,NaH2P04・%,K2HP04・%,MgS04•%,%,%,;初筛第一步结果如F:产生菌来源分类数量注释说明花生地细菌16株真菌和放线菌丢失菜园地土壤I(细菌)21株土壤II(细菌)23株汕菜地+,山于脂肪酸与漠甲酚紫(況甲酚紫变色范围的