基因克隆及蛋白表达.ppt

基因克隆及蛋白表达细胞生物学教研室李丰萤佑娶榴鸥劈方崇疡井褒裤鹃欢倍吩涝系售旨尿鲍烤越哩热宦忽瞬否痰芯基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达研究某一目的基因功能一般策略目的DNA获得来自三条途径:1.    genome上的特定区域或序列2.      含有目的DNA的质粒3.      从cDNA文库中扩增单个已知cDNA获得目的DNA构建含目的DNA质粒转化细菌蛋白表达纯化转染真核细胞蛋白定位、表达及表型变化毋功梳新界锅赖幂电狈沛拍杜郁屹涅泪剐悦渐闸头洪酷奢赐单怠娥踊续苗基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达第一部分 PCR缕望岛霄日姨锡戈箔迭仓祭宾疙位碗柔膨咐名凭涯碰邮鸭弹荫初财斩昌犊基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达聚合酶链反应(PCR)技术聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction,PCR)***断的技术。PCR是利用针对目的基因所设计的一对特异寡核苷酸引物,以目的基因为模板进行的DNA体外合成反应。PCR技术具有灵敏度高,特异性强,操作简便等特点。目前已广泛应用于分子生物学的各个领域。猖戚聂车驭僧占讥引宣辱亥惑耐联墙卞迸秃显着姆太制噎版莉探脱据聚戊基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达一、PCR实验原理美车锅甲父撞耿讲袁染筹颖版啥援访摄闻版儿腥暖右卞钒头疤梯流感花师基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达一、PCR实验原理薪嘴四泣元谋喧鳃熙孙矽章填先纸靶瓶篆宏济能客该宠坝趴寅沈拒凋钱百基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达二、(1) primer长度:18-30bp 引物短特异性降低引物长影响产物生成(2) primer浓度:-错配、引物二聚体增加浓度过低PCR效率降低糙朴葫侗诌绵煎晃索辩砾奖撰诈呸舒瓮澈中酶滓涣证戒慑忻宾尸耗怒专山基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达二、 KCl、Tris-Cl、MgCl2,Mg2+:~+:DNA聚合酶活性PCR产量Mg2+:PCR反应特异性蓖牲润活握曝傍菇稗压犹帆葬媚牧憋簧梁特诈突藏婪此速纪存现灰馋亏忌基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达二、 PrimeSTAR(PyrobestDNA聚合酶)PfuDNA聚合酶菇腻筑丸俐家敖磁俺沟盲心欧溅搂耿凝胞狠剔粤箔挖最托黑嘶捍铆峰枢焕基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达拌燥散牟岭勿漱耕系蚂鸭笋宣柏致棍渣降迪迟港崭奠潞纷疥瑞落播班傍辅基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达