乳化异氟醚对乳鼠原代培养心肌细胞缺氧复氧损伤与影响.pdf

重庆医科大学硕士学位论文乳化异氟醚对乳鼠原代培养心肌细胞缺氧复氧损伤的影响姓名:杨孟昌申请学位级别:硕士专业:麻醉学指导教师:陈玉培20090501重庆医科大学硕士研究生学位论文乳化异氟醚对乳鼠原代培养心肌细胞缺氧/复氧损伤的影晌摘要目的:观察乳化异氟醚(Emulsifiedisofurane,EI,8%体积分数)对原代培养乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤后心肌细胞的作用,并对其可能的机制进行探讨,为EI以后在临床的研究及应用提供实验依据。方法:原代培养乳鼠心肌细胞,建立体外心肌细胞I-I/R损伤模型,随机分为18组,正常组(N组)、缺氧/复氧组(H瓜组)、脂肪乳组(F组)、、2、3、4、5、6、7、8、9、10倍分别分成EIl~EIlo组、H/R+10mmol·LJ格列苯脲组(G组)、和H爪+·L~E1+lOmmol·L。1格列本脲组(EIG组)、H/R+100nmol·LJwortmannin组(W组)、H瓜+-L~EI+100nmol·L。1wortmannin组(EIW组)和H爪+·L—EI+10umol·LJBayK8644组(EIB组)各组取细胞培养上清液测定乳酸脱氢酶(LDH)活性和心肌肌钙蛋白I(cTnI)含量,细胞匀浆后测定心肌细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(加A)含量;倒置显微镜观察心肌细胞生长的特性及形态的变化;流式细胞术检测N组、H/R组、F组、E16组、EIB组细胞内钙离子浓度;Westernblot检测N组、H/R组、F组、E16组,IIEIW组心肌细胞AKT的磷酸化水平。结果:1心肌细胞形态学观察:心肌细胞培养24h出现自发性搏动,72h2重庆医科大学硕士研究生学位论文后聚集成簇,。细胞形态呈梭形或不规则三角形,伪足明显,可发生相互融合,且其超微结构完整、清楚。H/R后心肌细胞皱缩变圆,伪足减少,细胞搏幅减弱、频率减慢甚至出现停搏,EI和脂肪乳组对H/R心肌细胞的形态结构有明显改善。2各组心肌细胞SOD、LDH、cTnI活性与MDA含量的比较:与对照组比较,H爪组细胞SOD下降,MDA、cTnI和LDH升高(P<)。EI组与H/R组比较,心肌细胞SOD活性提高,MDA、cTnI和LDH含量降低(P<)。3EI组和脂肪乳组均可降低H瓜损伤心肌细胞的损伤(P<),但EI组与脂肪乳组比较降低更明显(尸<);Et可显著上调SOD活性(P<)、降低MDA、cTnI和LDH含量(尸<);脂肪乳仅能上调SOD活性,对MDA、cTllI和LDH含量无影响(尸>)。<<MKTW组<<。5心肌细胞钙离子浓度水平是N组<E16组<EIB组<F组<UfR组。结论:l删体外培养乳鼠心肌细胞可以造成明显的损伤。2乳化异氟醚对体外培养乳鼠心肌细胞H/R损伤具有保护作用,表现为能提高细胞存活率,抑制氧自由基产生,降低心肌细胞钙超载,提高AKT磷酸化水平,促进复氧时心肌细胞功能的恢复等。关键词:乳化异氟醚;缺氧复氧;心肌;细胞;EFFECTOFEMULSIFlEDISOFLURANEoNTHENEONATALRATPRlMARYCARDIACMYOCY’I'ESHYPOXIA/REOXYGENATIONINJURYABSTRACTObjective:Todiscusstheeffectofemulsifiedisoflurane(E1)withdifferentdosageonneonatalrathypoxia/reoxygenation(H/R):TopreparetheH/Rinjurymodelonthebasisofin-vitroneonatalratcardiacmyocytescultureanddividetheminto18groupsatrandom,namely,normalcontrolgroup(Ngroup),H/Rgroup,H/R+fatemulsiongroup(Fgroup),Theone,two,three,four,five,six,seven,eight,~EIlogroup,H/R+