PTEN基因在原发性肝细胞癌中表达的研究.pdf

青岛大学
硕士学位论文
PTEN基因在原发性肝细胞癌中表达的研究
姓名:王恩华
申请学位级别:硕士
专业:遗传学
指导教师:王培林;王修海

基因在原发性肝细胞癌中表达的研究摘要青岛大学医学院级遗传学专业硕士学位研究生王培林教授硕士生导师王恩华王修海副教授湟煸谠⑿愿蜗赴中的作用,探讨肝癌发生的分子生物学机制。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应狿际酰伟┳橹┡宰橹齁下常肝组织细胞中驯基因的表达情况进行了检测和分析。结果①例肝癌患者的癌组织中阳性表达率为./嘤Π┡约罢W橹蠵蚓猧%表达,┳橹┡③低分化肝癌组织中基因表达水平明显低于高、┳┳橹蠵虮泶锼接牖颊叩哪炅洹⑿员鹞尴灾喙性值均大于。结论①原发性肝细胞癌中蛞跣员泶锫式系停虎赑基因在肝癌组织中表达水平明显低于癌旁组织和正常组织,提示基因失活与肝癌发生密切相关;③原发性肝细胞癌中表达水平与肝癌恶性程度有明显相关性,提示变异可以作为患者预后的指标;④肝癌组织中。基因表达水平与卫星目的研究抑癌基因组织、正常组织中的表达水平分别为为士士、.縮士士。统计学分析表明在这三种组织中基因的表达水平有显著差异。.8伟┳橹蠵虮泶锼矫飨缘陀诎┡宰橹和『┡宰橹驼W橹械谋泶锼轿尴灾钜;转移灶的有无及患者的性别、年龄均无明显相关性。关键词:篐⑸⒄肝细胞癌摘要
.②:④:⑤.賂孩孩畆’独:≈.竣觥痑..￡士、±辏簊爹:%ⅰⅰ痑‘甧畐痑’瑆’琯
基因在原发性肝细胞癌中表达的研究前言长发育、信号传导、迁移、凋亡过程中起到重要作用。该基因的突变失活与人类大多数肿瘤的发生发展密切相关。、心脏、脑、肺、肝等组织的表达水平较高,国外有学者研究发现肝癌中存在肝癌中的表达,发现肝癌组织中存在较高比例的蛋白的阴性表达率,说明基因失活在肝癌发生中起着重要的作用。目前,有关的研究集中于基因的缺失和突变,而对于基因的表达则研究得较少,用—ù觤缴霞觳釶本研究应用半定量等技术从水平检测基因在肝癌组织、癌旁讨肝癌发生的分子生物学机制,为今后以为新靶点治疗肝癌提供理论依据。原发性肝细胞癌籋且恢指叻⑿远裥灾琢觯重危害我国人民的身体健康。许多研究表明,姆⑸婕岸嗷颉⒍喾肿铀降改变。,是于年发现的第一个具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因,定位于,由鐾庀宰幼槌桑琍鞍自谙赴纳,频率高达%左右⋯,预示着蠵蚩赡芊⑸槐取应用咏环ḿ觳庹H颂宥嘀肿橹蠵騧谋泶铮在着基因的突变。张利能、张晋夏等“用免疫组化方法检测了蛋白肝癌中的表达,国内外尚未见到报道。组织及『W橹械谋泶锴榭觯治鯬Щ钤诟伟┓⑸械淖饔茫佣徊教蛴称或—和失活。積前言’
牧嫌敕椒研究对象试剂与材料断符合年全国第觳《拘愿窝籽趸嵋樾薅┑牧俅舱锒媳曜疾⒕鹾蟛±~年月期间青岛大学医学院附属医院及青岛市市立医院肝胆外科手术患者。例患者为肝细胞癌组组渲心行炅辏骄炅湮辏踔腥“┣┡郧距癌边缘组织标本,共份。例肝血管瘤手术患者为正常对照组组渲心行例,女性炅辏骄炅湮辏踔腥≌8巫橹瓯尽诊检证实。.约良袄丛约脸鼶外,其他均购自上海生工生物工程公司罅ι锕こ逃邢薰铩见表杀本┤偈⒐竞铣材料与方法.×。—
:崛∷肨⒔固***岫阴裙鹤陨虾I物工程公司。培养液、狧液购自美国尽器材微量加样器型电泳仪低速离心机高速台式离心机狟水浴恒温振荡器紫外透射仪隔水式电热恒温培养箱来源深圳沙头角国华仪器厂上海跃进医疗器械厂北京科普仪器厂愕缬疽狪型电泳仪材料与方法、、
方法觯痬糜谙赴躌提取。加***仿,用力振荡浞只煸龋椅戮仓胠。弃上清,将沉淀物匀桓稍铮缓笥肙.%的无芙釸。①无菌罩内紫外灯照射吸水纸。②将%醇溶解的樱渲腥〕觯痬,离心笥摇⑧无菌室内,将乙醇倒掉,管放吸水纸上倒置控干。夹左右④管基本干燥后,于每个大管中加由反转录试剂盒提供的⑤加水完毕,用手指轻弹管,。以便浞秩芙狻⑥紫外分光光度计测定返腛和担怨鄄焖崛⊙,然后用无菌眼科剪将组织剪碎至直径约小块。。,置℃水浴消化。消化完毕,经坎恍飧滞撕笠迫胧怨埽/胄弃上清液,细胞沉淀用合~∈约罷竦椿煸取妫痬离心粕喜闼含至一新管中,加异丙妫痬离心恋鞷。弃上清,沉淀用ヒ掖枷淳唬,痬离心。觯痬移入管中,加醇,。合成材料与方法玪甪.
聊孀B蓟撼逡,加热,然后快速冷却至,以灭活逆转录酶,并