二烯丙基化三硫体外抗粪肠球菌生物膜作用研究.pdf

原创性声明IIIIIIIMIIUY2424697本人声明,所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了论文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。作者签名:迹日期:二堕年立月二日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文,允许学位论文被查阅和借阅;学校可以公布学位论文的全部或部分内容,可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》,并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名:盟导师签名日期:丝L年L月三日摘要二烯丙基化三硫体外抗粪肠球菌生物膜作用的研究目的:观察大蒜素对照品二烯丙基化三硫(diallytrisulfide,DATS)体外对生物膜中粪肠球菌的杀灭或抑制作用。方法:1、采用倍比稀释法测定DATS和盐酸多西环素对粪肠球菌标准菌株最小抑菌浓度(~ⅡC)和最小杀菌浓度(ⅧC)。2、采用MTT法测定不同时间点的粪肠球菌活性,绘制细菌生长曲线;在96孔细胞培养板上培养细菌,形成不同生长周期的细菌生物膜,MTT法测定不同浓度的DATS或盐酸多西环素对不同时期细菌生物膜的抑菌率。3、在牙本质片上培养细菌,激光共聚焦显微镜(CLSM)观察细菌生物膜形成过程中的形态特点;CLSM观察不同浓度的DATS或盐酸多西环素对不同生长周期细菌成熟生物膜的抗菌效果。结果:1、实验组DATS对粪肠球菌的最小抑菌浓度(MIC)为1280“g/m1,最小杀菌浓度(MBC)为2560}tg/m1;,MBC为16099/ml。2、128099/mlDATS对对数期和饥饿期生物膜中粪肠球菌抑菌率约71%,显著高于对稳定期生物膜中粪肠球菌的抑菌率58%,其差异具有统计学意义(P<);2560},tg/mlDATS和5120“g/mlDATS抗生物膜粪肠球菌效果显著优于1280}tg/mlDATS,其差异具有统计学意义(P<);51201ag/mlDATS对饥饿期生物膜粪肠球菌的抑菌率达97%,显著高于其他浓度的DATS对各期生物膜粪肠球菌的抑菌率或该浓度DATS对其他两期的抑菌率,结果均具有统计学差异(P<);对照组盐酸多西环素的浓度增高时抑菌率增大,80“g/ml的盐酸多西环素抗对数期或饥饿期生物膜粪肠球菌的抑菌率与5120}tg/mlDATS比较,差异性不具有统计学意义(P>),但该浓度盐酸多西环素对稳定期生物膜粪肠球菌的抑菌率优于DATS组,差异性具有统计学意义(P<)。3、粪肠球菌生物膜具有立体空问结构,生物膜由红染区(死细菌)与绿染区(活细菌)组成。对数期、稳定期、饥饿期生物膜均经历粘附、发展、成熟三个阶段,从粘附期至成熟期生物膜厚度增加,更结实致密;相同阶段生物膜,饥饿期较对数期、稳定期细菌密度低,结构疏松,表面粗糙。实验组DATS和对照组多西环素均能使粪肠球菌生物膜的激光共聚焦显微影像红染面积增加,即能杀灭或抑制生物膜粪肠球菌;且随浓度增加,红染面积增大,细菌生物膜更分散疏松。结论:1、DATS对生物膜中的粪肠球菌具有明显杀灭或抑制作用。2、DATS能破坏粪肠球菌的生物膜结构,杀灭生物膜内部的细菌。3、DATS对饥饿期粪肠球菌生物膜杀灭作用良好。图9幅,表1个,参考文献106篇。关键词:二烯丙基化三硫;粪肠球菌;细菌生物膜;体外抑菌活性;MTT:激光共聚焦分类号:500;usfaecalisBiofilmsInVitroAbstractobiective:ThisstudylStoobservediallytrisulfide(DATS):’heminimuminhibitoryconcentration(MC)andminimumbactericidalconcentration(MBC)usfaecalis(29212).,,