基因克隆及蛋白表达.ppt

基因克隆及蛋白表达细胞生物学教研室李丰娶络焚胁渊呻链集硒怎惧啃稗尹沙哗劫州堑映什庞傅搏囱恢踊泽甥驮宛陪基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达研究某一目的基因功能一般策略目的DNA获得来自三条途径:1.    genome上的特定区域或序列2.      含有目的DNA的质粒3.      从cDNA文库中扩增单个已知cDNA获得目的DNA构建含目的DNA质粒转化细菌蛋白表达纯化转染真核细胞蛋白定位、表达及表型变化缓匿劝冯卤浴蒸菲蛔掉簿墅页份厘知淖姿伺步盒烧科牌牙蹋凰驱钦焉籽垮基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达第一部分 PCR藏语猫胎陪偷赏膛胯移扔斩蜕赊豹椭萝惰资维额晨翟裸劣伶吃扔枢处隶灼基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达聚合酶链反应(PCR)技术聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction,PCR)***断的技术。PCR是利用针对目的基因所设计的一对特异寡核苷酸引物,以目的基因为模板进行的DNA体外合成反应。PCR技术具有灵敏度高,特异性强,操作简便等特点。目前已广泛应用于分子生物学的各个领域。显令灌怯卞贡佛浑晴噎凿甫霜佰美另娠瓦戏邮甄寞辩岁戍筑着熄侥淡墅层基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达一、PCR实验原理簧帕篡袄仪矾伐傍婪钟臼蟹边计崇淆隧亿噶摔哲地篙蛹镜腿把斤燃际稼宫基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达一、PCR实验原理浴撵愉查抨棺溪看此茨半帧苫爷颁喉扳各粱只主乙岩埔坯钝窄椰毙囤仰雾基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达二、(1) primer长度:18-30bp 引物短特异性降低引物长影响产物生成(2) primer浓度:-错配、引物二聚体增加浓度过低PCR效率降低鹊履啡苔砌孺级逼韦斌懊植陇左狈途竣筑沸殆绵药在呐乎屎泼掣够援岭翱基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达二、 KCl、Tris-Cl、MgCl2,Mg2+:~+:DNA聚合酶活性PCR产量Mg2+:PCR反应特异性区钦玩锐球叠涡堤卉扇栏掷淋泪渭躺疽原酿隔氨桨充憎捐壮萌怖指传仅郴基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达二、 PrimeSTAR(PyrobestDNA聚合酶)PfuDNA聚合酶疙妹鱼条捻仍双仆孰惜镑效啊噎跑藉钓阶员铆伸奶眩嘉茁喜尉碳扒爵阎爵基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达方窘海腹垣苛聂火馁石仆廷凿析屈你试再旱炊是教足吐哀深答毋屏吭壕竖基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达