10株不同年代H9N2 AIV NA基因的克隆及序列分析.pdf

华北农学报·,:
—曲
株不同年代基因的克隆
及序列分析
, 杨大光,一,王新卫,王泽霖,周欣
.河南农业大学牧医工程学院河南郑州;.河南科技学院食品学院,河南新乡
摘要:,序列分析表明,
株的基因的核苷酸和推导的氨基酸同源性高,进化稳定。系统进化树分析表明,其基因都属欧亚大陆
禽分支,流感病毒的分布与地域有相关性。其蛋白氨基酸序列潜在的糖基化位点以及氨基酸红细胞吸附位
点出现的变化尚不能解释这些毒株生物学特性上的差别。但这些研究结果从理论上丰富了亚型禽流感的分子
流行病学,也为进一步研究该类毒株的进化提供了依据。
关键词:;基因;克隆;序列分析
中图分类号:.; 文献标识码: 文章编号:———

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亚型禽流感病毒是欧亚大陆存在的进行神经氨酸酶基因的克隆和序列分析,研究
主要禽流感病毒。其变异频率很高,同一亚型内毒株基因茎部缺失情况和基因的进化情况,对潜在
间的致病力存在差异,同一毒株感染不同宿主时致病的糖基化位点和红细胞吸附位点进行比较分析,旨
力也存在着差异,一个毒株在同一鸡群中长期流行时在探究基因的变异对毒力的影响,探究抗
可能会随着对宿主的适应导致毒力增强。而且, 原性的差异、存在抗原性差异的毒株间的免疫原性
随着亚型禽流感疫苗的广泛使用,在变化不大的分子机理,也对研究毒株的宿主特性及
疫苗的选择压力下变异加快,以致现有的疫苗亚型与分子流行病学具有重要意义。
当地流行的的抗原性不完全相符,从而造成免疫
材料和方法
禽群仍可发生和流行。
本研究对—年间分离的个. 病毒
亚型毒株涵盖不同致病力、抗原性、分离年代个不同年代分离到的亚型禽流感病毒
收稿日期:一一【
基金项目:河南农业大学博士基金资助项目
作者简介:杨大光一,男,河南武陟人,硕士,助教,主要从事动物病毒学研究。
通讯作者:王新卫一,男,河南泌阳人,博士后,主要从事动物病毒学研究。
量量
期杨大光等:株不同年代基因的克隆及序列分析
砌强
分离株表。均由河南农业大学禽病研究所保存。司产品;反转录试剂盒、—
. 主要试剂为产品;胶回收试剂盒、质粒快速
一柱式总抽提试剂盒、氯仿、提取试剂盒、、.、琼脂糖、、
异戊醇、无水乙醇均为上海生工生物工程技术有限公、限制性内切酶为产品。
表个毒株的背景材料
.
注:上述霉株再次出现时均以代号表不。
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. 病毒的增殖物工程有限公司,用软件与上已
将株鸡胚增殖液作/稀释,用细发表的序列:////;/
菌滤器过滤后接种于~日龄非免疫鸡胚尿囊腔/ // ; //
./胚,培养,弃内死胚,以后每隔// ;// //
~照胚次,死胚置保存,后仍存活的;/ /// ;/
鸡胚置℃冰箱过夜。然后收获尿囊液,置一℃/// ;/ /
冻存用于核酸提取。// ;/ / //
. 引物的设计与合成;////;/ —
参照国内外已发表的亚型的基///;/ //;/