白三叶根的解剖结构观察.doc

研究生课程论文(作业)封面(2009至2010学年度第2学期)课程名称:植物显微技术课程编号::李微学号:1004250年级:2010级提交日期:年月日成绩:__________________教师签字:__________________开课---结课:第周---第周评阅日期:年月日东北农业大学研究生部制白三叶根的解剖结构观察白三叶,学名:Trifoliumrepens,为豆目科三叶草属的多年生草本植物。别名:白车轴草、荷兰翅摇、白三草、白花三叶草等。茎匍匐,无毛,茎长30-60厘米。掌状复叶有3小叶,小叶倒卵形或倒心形,—,宽1—2厘米,栽培的叶长可达5厘米,,顶端圆或微凹,基部宽楔形,边缘有细齿,表面无毛,背面微有毛;托叶椭圆形,顶端尖,抱茎。花序头状,有长总花梗,高出于叶;萼筒状,萼齿三角形,较萼筒短;花冠白色或淡红色,旗瓣椭圆形。荚果倒卵状椭圆形,有3—4种子;种子细小,近圆形,黄褐色。花期5月,果期8-9月。本实验采用石蜡切片法,并结合番红、固绿染色法对白三叶根的解剖结构作了详细研究。、 材料:白三叶(Nicotianatabacum) 仪器与试剂:旋转切片机;展片台;温箱;乙醇:分析纯;二甲苯:分析纯;甲醛:分析纯;冰醋酸:分析纯;石蜡。:,转入70%的FAA溶液(70%乙醇:甲醛:冰醋酸=90:5:5)中固定24小时以上待用。:70%酒精→85%酒精→95%酒精→纯酒精→纯酒精→2/3纯酒精+l/3二甲苯→1/2纯酒精+l/2二甲苯→1/3纯酒精+2/3二甲苯→纯二甲苯→纯二甲苯(每个梯度透明2h,其中95%酒精时加适量番红过夜,纯酒精及纯二甲苯为1h)。:第二步纯二甲苯后加入适量蜡削至饱和,并置于37℃烘箱中过夜。第二天早上把烘箱调至65℃后,倒出1/2的体积,再加入1/2体积的纯蜡→倒出1/2体积,再加入1/2体积的纯蜡→倒出1/2的体积,再加入1/2体积的纯蜡→全部倒出,加入纯蜡→全部倒出,加入100%纯蜡(每个梯度2h,全部倒出为1h)。,编号后,把从65℃烘箱中取出的纯蜡倒入纸船中,用预热的镊子把材料迅速置入纸船中,摆好位置,自然冷却。:待纸船中的蜡完全凝固后,将蜡块取出,用单面刀片修刻成梯形,粘附于小木块上。旋转切片机切片,厚度为8μm。:在干净的载玻片上涂微量粘片剂(1:1的蛋白质与甘油),把蜡带按顺序置于载玻片上,滴适量蒸馏水,置于45℃的展片台上,使蜡带完全舒展。:将载玻片置于38℃的烘箱中4~7天,烘干。:把烘干的载玻片放在染色架上,按下列步骤进行染色:纯二甲苯(1h)→纯二甲苯(1min)→2/3纯酒精+l/3二甲苯(2min)→1/2纯酒精+l/2二甲苯(2min)→1/3纯酒精+2/3二甲苯(2min)→100%酒精(1min)→90%酒精(2min)→85%酒精(2min)→70%酒精(2min)→50%酒精(2min)→30%酒精(2min)→蒸馏水(2min)→1%番红(5min)→蒸馏水(2min)→30%酒精(2min)→50%酒精(2min)→75%酒精(2