中药制剂检测技术第七章中药制剂检测新技术.ppt

第一节毛细管电泳法第二节中药指纹图谱第三节电感耦合等离子体质谱法纪从兰老师编写毛细管电泳法( CE )又称高效毛细管电泳( HPCE ), 是20 世纪 80年代发展起来的一类高效快速的分离分析方法, 是经典电泳技术和现代微柱分离相结合的产物。毛细管电泳仪一、概述(一)基本原理以弹性石英毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,依据供试品中各组分的淌度(单位电场强度下的迁移速度)和(或)分配行为的差异而实现各组分分离的一种分析方法。电渗流(二)特点高效低耗快速广谱 HPCE 与 HPLC 的比较 1. 柱效更高,理论板数可达 10 5 ~10 6 /m,主要是由于该法无固定相,不存在传质差异,整个流体就像塞子似的以匀速向前流动。 2. 分析速度更快,几十秒至十几分钟内即可完成一个试样的分析。 ,样品用量仅为纳升( nl)级。不需高压泵输液, 毛细管价格低廉,因此工作成本更低。 ,该法有很大的选择性,可对各种成分进行有效的分离。例如,中性有机分子、无机离子、蛋白质等高分子化合物,甚至整个细胞或病毒。 HPCE 和 HPLC 柱中溶液流型的比较(三)毛细管电泳常见的分离模式 ( CZE ) CZE 又称为自由溶液区带电泳,系毛细管电泳中最简单、最基本、应用最广的一种操作模式,即将分析溶液引入毛细管进样一端,施加直流电压后,各组分按各自的电泳流和电渗流的矢量和流向毛细管出口端,按阳离子、中性分子和阴离子及其电荷大小的顺序通过检测器。 CZE 的特点是操作简单,快速,分离效率高,应用范围广。 CZE 较适合带电溶质的分离,由于中性物质均系靠电渗流( EOF )迁移,不存在迁移速度的差异,故中性组分彼此不能分离。 2 .毛细管凝胶电泳( CGE ) 该法在毛细管中装入单体和引发剂引发聚合反应生成凝胶,该方法主要用于分析蛋白质、 DNA 等生物大分子。另外还可利用聚合物溶液,如葡聚糖等的筛分作用进行分析,称为毛细管无胶筛分。有时将它们统称为毛细管筛分电泳,下分为凝胶电泳和无胶筛分两类。 3. 毛细管等速电泳( CITP ) 该法采用前导电解质和尾随电解质,在毛细管中充入前导电解质后,进样,电极槽中换用尾随电解质进行电泳分析,带不同电荷的组分迁移到各个狭窄的区带,然后依次通过检测器。 4. 毛细管等电聚焦电泳( CIEF ) 将毛细管内壁涂覆聚合物减小电渗流,再将样品和***电解质混合进样,两个电极槽中分别加入酸液和碱液,施加电压后,毛细管中的操作电解质溶液逐渐形成 pH 梯度,各溶质在毛细管中迁移至各自等电点( pI)时变为中性,形成聚焦的区带,而后用压力或改变检测器末端电极槽储液的 pH 值的办法使溶质通过检测器。毛细管等电聚焦分离示意图 5. 胶束电动毛细管色谱( MEKC 或 ) 该法系以胶束为假固定相的一种电动色谱。当操作缓冲液加入大于其临界胶束浓度的离子型表面活性剂如十二烷基硫酸钠( SDS )或十六烷基三***溴化***( CTAB )、胆酸等,这时表面活性剂就聚集形成胶束(假固定相),其亲水端朝外,憎水非极性核朝内,溶质则在水和胶束两相间分配,各溶质因分配系数存在差别而被分离。对于常用的阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠( SDS ), 进样后极强亲水性组分不能进入 SDS 胶束,随操作缓冲液流过检测器(容量因子 k′=0 );极强憎水性组分则进入 SDS 胶束的核中不再回到水相,最后到达检测器( k′=∞)。 的分离原理示意图