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中山大学
博士后学位论文
尿酸对腹膜间皮细胞增殖及表达炎症因子的影响
姓名:詹林达
申请学位级别:博士后
专业:内科学
指导教师:黄锋先
20080901
,鱀患者存在高尿酸血症,患者腹膜透析灌洗估计全人类有一百多万人遭受终末期肾脏疾病的折磨,而且这类患者正在以每年%的比例增加,治疗选择包括腹膜透析、血液透析和肾脏移植。腹膜透析代治疗方法之一。与相比,在开始透析的昴谧芴迳媛史矫优于;患者在家自行完成;不用打针;更好的清除中分子毒素;能更好地延缓残余肾功能下降;患者移植肾功能恢复延迟发生率低;获得血源性病毒感染的危险性较小。因此,有学者认为应占透析总人数国有非常广阔的发展前景。但发展也存在制约因素,患者还存在腹腔局部的慢性炎症状态,介导腹膜纤维化的发生,腹膜纤维化导致的超滤功能丧失是维持性腹膜透析患者退出的主要原因。液中尿酸水平增高,异常尿酸水平,能否影响腹膜的超滤功能呢关尿酸致病的研究有很多报道,血尿酸水平与痛风发病率呈正相关;血,锹陨龉δ芩ソ叩闹匾L的%~%为宜。目前,全球大约有%人耐肝龌颊卟用方式,而我国大陆患者仅占透析治疗的%左右。因此,在我清尿酸水平增高是影响中重度慢性心力衰竭患者预后的一项独立的预测指标;尿酸可明显促进细胞增殖;可溶性尿酸可以促进炎症反应。但目前还不清楚尿酸是否参与腹膜间皮细胞的激活,从而产生炎症、致纤维因表达,导致腹膜纤维化。鉴于上述原因,我们设想尿酸可介导腹
目的:观察尿酸在体外对人腹膜间皮细胞譓增殖的影响。研本研究拟通过建立体外培养的,分别不同浓度的尿酸刺激膜间皮细胞的激活,此类研究尚未见报道。腹膜间皮细胞表达细胞因子、趋化因子在腹膜炎及腹膜纤维化进展过程中起着十分重要的作用。目前尚无有效的解决办法。过氧化物酶增殖物活化受体琍丫罨缶哂锌寡仔вΑ4笫蟾鼓间皮细胞结构性表达受体,受脂多糖碳ず蟊泶锷系鳎吖配体可显著抑制榈嫉腃虸蛋白的表达,提;ひ蜃覤表达变化。探讨尿酸对人腹膜间皮细胞第一部分尿酸对腹膜间皮细胞增殖、损伤的影响究尿酸对作用的时间一效应及剂量一效应关系、尿酸对的损伤作用,探讨尿酸对的作用机制。方法:⑾赴嘌胺肿椋待生长状况良好的株.%细胞贴壁后,无血清培养基同步然后根据分组给予相应的刺激。给予不同浓度和时间尿酸刺激。指标检测:采用壬ǚḿ觳、、度的尿酸刺激、、定试剂盒,检测培养液中乳酸脱氢酶剑佣范ㄗ罴涯蛩示可能通过负性调节炎症介质分泌而参与腹腔局部防御。,观察刺激后增殖、损伤;纤亓蛹っ、影响的作用及臼芴寮ざ炼阅蛩嵝вΦ母稍ぁ/驢鲋城榭觯煌辈捎萌樗嵬亚饷覆浓度。结果:⒂氪碳で氨冉希蛩嵩一/饔门ǘ确段尿酸对腹膜问皮细胞增殖及表达炎症因子的影响
/蛩岵煌饔内,抑制增殖;与对照组比较,不同程度地抑制增殖,随尿酸浓度增高、作用时间延长,。⒂攵哉兆楸冉希煌ǘ鹊哪蛩峤允笻嘌褐蠰水平增高,尿酸在/饔门ǘ确段冢琇水平增高明显,呈剂量、时间依赖效应,差异均有显著性伊.=崧郏耗蛩崮芄抑制细胞增殖、诱导损伤,呈剂量、时间依赖效应。第二部分罗格列酮对尿酸致腹膜间皮细胞,增殖、损伤的干预作用目的观察激动剂罗格列酮对尿酸致腹膜间皮细胞增殖、损伤作用的影响。方法:⑾赴嘌胺肿椋捍状况良好的株.%细胞贴壁后,无血清培养基同步捎/薷窳型Tご硐赴小时后,给予时间进行干预口⒅副昙霳捎肕壬ǚḿ觳增殖情况;采用乳酸脱氢酶测定试剂盒,检测培养液中乳酸脱氢酶健=峁、/蛩嶙饔肏后,抑制增殖;’与对照组比较,;罗格列酮干预后,各不同时间点,尿酸对抑制作用减弱。螅琀嘌中皆龈撸攵哉兆楸冉希型臣蒲б庖;罗格列酮干预后,各不同时间点,培养液中浇档。结论:罗格列酮能够降低尿酸对增殖抑制、损伤作用。、、尿酸对腹膜问皮细胞增殖及表达炎症因子的影响气
第三部分罗格列酮对尿酸诱导腹膜间皮细胞表达导人表达炎症因子,整合素连接激酶琓—的作用。方法:⑾赴嘌胺肿椋捍ぷ纯隽己玫腍ハ赴壁后,无血清培养基同步赴治6哉兆只使用培养液⒛/薷列酮⒛蛩罗格列酮组嘌//薷窳型Tご硐赴小时,然后根据分组给予相应的刺激。⒅副昙霳捎妹噶C庖呶绞匝检测上清液中蛋白的浓度、采用量际跫觳釮腎纤亓蛹っ、狟鞍缀突虮达。结果⒛、部分抑制尿酸诱导的整合素连接激酶幕和蛋白表达的上调。结论:尿酸能直接作用于人,诱导炎症分子的超表达,可能是其腹膜慢性纤维化形成的重要机制之一;罗格列酮具炎症因子的影响目的观察/蛩崤ǘ仍诓煌奔浞段、、诱酸组嘌/蛩、罗格列酮组嘌/薷窳型酸8稍ぷ榉直鹣炔捎方法、荧光定白对