南方红豆杉中内共生真菌的分离、鉴定及其耦合培养初探.pdf

摘要摘要 do舢19lls)和其宿主的关系,自南方红豆杉(豫㈣动加P邶括vaLmairei)中分离了1000余株内共生真菌,并做了初步分类鉴定。主要内共生真菌分布予以下属:围小丛壳菌属G肠所E陀妇职、葡萄痕孢属肋乃诎r搠口 m、葡萄孢属肋以恤够、头孢霉属&砷n胁s印r跏掰职、青霉属n拧缸川f蜊苹、曲霉属4胖枷踢、轮生菌属跆砒册埘w踞、桶孢属彳砌劬删堋够、木霉属乃纠b棚踞、厚壁孔孢属GI锄础出够、无色芽枝霉属场训j如,砌俐跟、拟茎点霉属朋Dm唧妇m、粘鞭霉属GffDm船嘶够,镰刀菌属凡岱胛fz册踱、线壳囊孢属0和妒D,讯口够、小白壳囊孢属***@fD￡印您肋够、疱霉属砌D州口够、刺盘孢属co胜fo施^甜脚跟、散囊菌属毋f,D玎堋踞、黑曲霉属4胖枷踞、链毛孢属勋印细撕髓踢、黑团孢属Per话D"缸够、支链孢属彳打聊l甜幻够、圆砖孢属阳Dc肠讲“m踞、树粉孢属D幼D如删幻珂踞、向基孢属鼬枷枷irf删够等。优势属为镰刀菌属。得到了9株能产紫杉醇的内共生真菌,以菌株Ylll7的产量性状最高,针对Ylll7进行了菌种的系统鉴定,包括产物产量鉴定、形态学鉴定和分子生物学(18S rDlNA、hncmal怕n∞r、D-tublllingc∞)鉴定,确定其为从南方红豆杉中分离得到的一株能产紫杉醇的腑f“脚属新种,暂定名为美丽镰刀菌(n瑚rf柳lM抛f ChcIlg L-甜1幻wY)。本菌株已申请专利,申请号: ,本专利已公开,l670180A。针对菌种筛选和菌种改良,进行了高通量筛选的研究,得到较优的筛选条件为:玻璃纸平板培养5天,菌丝体500c真空干燥5h,(1:1)混合溶剂浸提2h,重复3次,}玎?LC/Ms检测。考虑到实验安全等因素,采用上述条件,(1:1)。针对内共生真菌培养过程中紫杉醇的检测方法进行了验证和改良,认为,快速准确地分析菌丝体或发酵液中的紫杉醇,同时又能消除其它结构类似物的影响,vIS是一个较好的选择。利用取得自主知识产权的耦合式生物反应器对F m口抛f和东北红豆杉(Z c嘲,豇幻细)细胞进行了耦合培养,发现耦合培养时无论是植物细胞还是微生物细胞的紫杉醇产量均有不同程度地提高,生长曲线和代谢曲线也有所变化,并对此现象作了初步分析,为进一步研究内共生真菌的植物宿主之问的具体作用物质和作用原理打下了基础。关键词;紫杉醇、内共生真菌、美丽镰刀菌,z艇耐删m口抛f、高通量筛选、肿Lc舢s、耪合培养、共生机理、18s rDNA、ITs、p-m附in gene 江南大学博士学位论文 Abstract m order t0stIldyme佗lationbe铆啪印dofhngi雒d meirho瓯moretll孤1,000 endoAm西we∞∞p盯a锄fbm了幻fl盥c而i—B, and werep佗liI】】i]【面ly c1私sified identified forstIldy on tlle豫lationof也eendo丘mgi mld theirho咄The辩 endofIlngi werc mostlydis伍b删鹊follow:G如m订讲肠啊.、肋幻胁施,m4够、 Botry髓ssp.、Cephdlospori"msp.、Pemcmi姗sp.、Aspergillt撂sp.、豫ticmi姗sp.、 AmblyoSporitlm sp.、Trichodermn sp.、Gilm璐f缸sp.、Hydodendron sp.、Phomopsis sp.、GliomnSt讧sp.、F1ls钟tm sp.、Q}fosp钟话n sp— sp—P抽mn sp.、 colle幻trichum sp.、Eumn栅t sp.、Asper蛋ll粥sp—sImpfotbix sp—n sp.、 Al把r眦r记sp.、矾oclnd锄帆sp.、o{mode谢细n sp.、Basipetosrillm sp..AnaFlls倒itlm 焉p w勰the prepondemnt. Among wmck 9paclitaXel-produc堍elldo铀西werc screened aIlds昀in Y1117 w船tllehi曲est the诅xol productivi何Systematic ideIltificationforstra缸Y1l 17 were carried out iIlcIudiIlgproductiVi劬morphological and molecul缸biology charac馏峨鹊1 8S rDNA,hlt踯Ial仃觚scribcd spacer,B-tubulill w