p16基因甲基化检测指导非小细胞肺癌放疗靶区设计的初步探讨.pdf

青岛大学
硕士学位论文
p16基因甲基化检测指导非小细胞肺癌放疗靶区设计的初步探讨
姓名:张立建
申请学位级别:硕士
专业:肿瘤学
指导教师:刘希光
20070526
蚣谆觳庵傅细胞肺癌放疗靶区设计的初步探讨要摘关键词:非小细胞肺癌;颍痪贩帕疲患谆匾煨跃酆厦链反应目的:利用分子生物学的方法,检测非小细胞肺癌组织与其相应远、近癌旁组织基因甲基化的差异,确定肿瘤的分子靶区,用来指导精确放疗靶区的设计,探讨这种方法的可行性以及临床价值。方法:选取例肺部疾病住院病人手术切除的病变肺组织和相应的病变旁组织为标本,其中例为肺癌,A夹苑尾考膊 1瓯揪厥夥椒ㄈ〔摹⒍炒妫缓筇取瓿蒁甲基化的修饰并进一步纯化,再进行甲基化特异性聚合酶链反应扩增目的基因,所得产物经琼脂糖电泳,溴化乙啶染色,在凝胶成像分析仪下观结果:例肺癌组织标本中,倒%趐基因启动子区域呈现异常甲基化,其中腺癌为郯例,细支气管肺泡癌倭郯例。在肺癌组织相应的近癌旁和远癌旁组织标本光镜下未见有肿瘤细胞存在。┳橹嘤Φ慕┡院驮栋┡⒆橹嘈汀⒎;甲基化特异性聚合酶链反应技术对肺癌病人标本中的蛞斐<谆测具有特异性,可进一步应用于肺癌生物靶区设计的探讨。察。
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论文作糍:纭地导撇:段郴日期山阥月药日日期:驴了年溯“日学位论文独创性声明用他人的成果,均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含壁律意义上已属于他人的学位论文知识产权权属声明论文作者签名:本人声明,所呈交的学位论文系本人在导师指导下独立完成的研究成果。文中依法引任何形式的研究成果,也不包含本入已用于其他学位申请的论文或成果。本人如违反匕述声明,愿意承担由此引发的—切责任和后果。日期:.#年字月巧日本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品,知识产权归属学校。学校享有以任何方式发表、复制、公开阅览、借阅以及申请专利等权利。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时,:保密口,“旧鞯陌嫒ü
∞嘲;.在临床中%~%为引言肺癌在中国、世界各国都是高发病率、高死亡率的肿瘤,随着科技和医学的不断发展,越来越多的肺癌被早期发现、早期诊断和治疗,并通过手术而得到了根治。但目前临床工作中存在两个问题:⒂行┎∪怂淙槐辉缙诜⑾郑捎诟髦衷虿荒芙行手术,放疗就成了这些病人获得根治的唯一希望;然而放疗是一把双刃剑,放射靶区大一些固然可以将肿瘤完全纳入,却同时也将对周围正常组织带来不必要、不可逆的放射损伤,影响长期存活病人的生活质量。这样,准确地确定肿瘤的放疗靶区就成了一个十分重要的事情。目前,随着模拟定位、放疗中的呼吸门控技术、实时照射技术等多种技术逐渐得到广泛应用,对肿瘤的靶区的要求也越来越高,若能更精确地确定肿瘤的生物靶区,必将会在根治肿瘤的基础上最大程度地减少病人的痛苦。日本已有研究表明对早期肺癌使用最先进的调强适形放疗可以达到类似手术的远期存活率,而通过更精确的放疗靶区的确定,可以进一步提高靶区的剂量并减少周围正常组织的放射损伤,从而进一步提高远期生存率。而如何更加精确地确定放疗的靶区,通过何种方法达到精确确定靶区的目的,仍然是临床和科研工作者需要面对和解决的众所周知,肺癌一般分为两种:小细胞肺癌和非小细于内分泌细胞来源的肿瘤,仅占%~%。过去人们对⑸难芯恐饕>窒于分析基因以点突变、小片段缺失、插入等方式造成的原癌基因的激活和抑癌基因的功能丧失。近期研究己表明,肺癌瘤细胞中常存在谆刺母谋洹U庵窒窒不仅可以激活原来保持沉默状态的基因,如生长促进基因特别是原癌基因的表达,而且’可使一些抑癌基因转录功能失活。因此,甲基化状态的改变与肺癌发生的关系极大,起着重要作用,是造成基因功能改变的又一重要机制。目前,在肿瘤发生机制中普遍接受的是细胞癌变的多基因协同假说,认为细胞癌变是多步骤、多重打击的复杂过程,其中包括癌基因的激活及抑癌基因的失活等。抑癌基因甲基化是抑癌基因失活的又一机制。抑癌基因失活可以导致细胞周期失控,,发生在荷稀R职┗因异常甲基化后可以干扰基因的转录,使基因的正常表达受损,从而引起细胞的异常增殖,导致细胞癌变。在肿瘤细胞中,异常甲基化最大的特点是全基因组的低甲基化和局部性高甲基化并存,