尿嘧啶DNA糖基化酶（UNG).pdf

尿嘧啶 DNA 糖基化酶
Uracil-DNA Glycosylase(UNG 酶)
一、产品规格
100ul 1U/ul
-20℃保存

二、产品简介
尿嘧啶 DNA 糖基酶(UDG酶)来源于大肠杆菌重组克隆表达。该酶分子量为 25KDa,它催化含尿
嘧啶的单链和双链 DNA 释放游离尿嘧啶,它对 RNA 无活性。主要应用于 PCR 扩增产物的防污染。
它的作用原理基于:在 PCR 反应中以 dUTP 替代 dTTP 掺入 DNA 中,形成了含 dU 碱基的 PCR 扩增
产物,Uracil-DNA Glycosylase能选择性断裂单链和双链 DNA 中 U 碱基的糖苷键,降解 PCR 扩增
产物。

三、单位定义
37ºC-50ºC,1 小时,可降解 1mg 含 dU 碱基的单链 DNA 的酶量为 1 单位。

四、酶储存缓冲液
50% glycerol, 30mM Tris-HCl (pH ), 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM DTT, % Tween
20。
五、反应缓冲液
10 x Reaction Buffer : 100mM NaCl, 200mM Tris-HCl (), 10mM EDTA, 1mg/ml BSA。

六、使用介绍
1、 Taq 酶与 UNG 酶的反应缓冲液和酶储存液可以通用。
2、通常将 Taq 酶与 UNG 酶按一定的比例加入 PCR 反应体系中,先 37ºC-50ºC 2 分钟,进行 dUTP
的消化,然后 94ºC4 分钟灭活,(同时这一步也达到预变性的效果),随后做 PCR 扩增。
3、 PCR 反应体系配制示例

1
热线电话:021-5446 0832 8009881995 E-mail:******@.cn 网址:
反应液组份加量(μl) 终浓度备注
10×PCR buffer 5 1×
上游引物 5 50~900nM
下游引物 5 50~900nM
dATP(10mM) 1 200nM
dGTP(10mM) 1 200nM
dCTP(10mM) 1 200nM
dTTP(10mM) 100nM
dUTP(10mM) 1 200nM 如果用全 U 则,终浓度为 400nM
Mg2+(25mM) 3
Taq 酶(5U/ul)
UNG 酶(1U/ul) 如果污染严重,可适当增加用量
模板 5
ddH2O
总体积 50

4、反应条件:37℃-50ºC 2 分钟,94℃4 分钟,然后 94℃30 秒 55℃30 秒 72℃60 秒 40
个循环,最后 72℃5 分钟。

七、质量控制
:大于 1u/ul。
2. Overdigest (OD) 检测: 5 单位 UDG 与 1 微克λDNA 在 37ºC 下反应 16 小时后,用琼脂糖凝胶
电泳未检出降解的λDNA。
Assay: 5 单位 UDG 与 50ng 3H- DNA 在 37ºC 下反应 4 小时,分解出的释放量小于 1%。