LDL、oxLDL对THP-1源性巨噬细胞PCSK9、LDLR表达的影响研究.pdf

南华大学
硕士学位论文
LDL、oxLDL对THP-1源性巨噬细胞PCSK9、LDLR表达的影响研究
姓名:程艳丽
申请学位级别:硕士
专业:病理学与病理生理学
指导教师:刘录山
20070501
原创性声明

本人声明,所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作
及取得的研究成果。尽我所知,除了论文中特别加以标注和致谢的地方
外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获
得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的
同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。

作者签名: 日期: 年月日



关于学位论文使用授权说明

本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权
保留学位论文,允许学位论文被查阅和借阅;学校可以公布学位论文的
全部或部分内容,可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文;学校
可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。

作者签名: 导师签名: 日期: 年月日
南华大学硕士学位论文
LDL、oxLDL对THP-1源性巨噬细胞PCSK9、LDLR
表达的影响研究

研究生:程艳丽
导师:刘录山副教授
专业:病理学与病理生理学
前蛋白转化酶( Proprotein convertase, PC)家族在多种前蛋白的生成过程中起
重要作用,PCSK9 基因(Proprotein convertase subtilisin/kexin 9-丝氨酸蛋白酶)编
码神经凋亡调节转化酶即 NARC-1, 是 PC 家族的成员之一,它能够在蛋白水平降低
肝细胞上 LDLR 的数量,影响 LDL 的内化,使血液中 LDL 不能被清除,从而导致
高胆固醇血症。该基因的突变成为继 LDLR、apoB100 基因之后的第三种引起常染
色体显性高胆固醇血症(ADH)的基因。研究 PCSK9 与 LDLR 之间的关系,探索
PCSK9 在高胆固醇血症以及动脉粥样硬化发生中的作用及机制,将有助于高胆固醇
血症和动脉粥样硬化发病机制的研究,也能为防治高胆固醇血症和动脉粥样硬化提
供新思路。本研究以 THP-1 源性巨噬细胞为研究对象,经过 LDL、oxLDL 处理后,
观察细胞水平 PCSK9、LDLR 的变化及其规律,为 PCSK9 在动脉粥样硬化发生发
展中的作用提供实验依据。

摘要
目的:探讨 LDL、oxLDL 处理 THP-1 源性巨噬细胞后 LDLR 和 PCSK9 表达
的变化,研究 LDL、oxLDL 对 PCSK9、LDLR 的不同影响,探讨 THP-1 源性巨噬
细胞中 PCSK9、LDLR 之间的关系。
方法:THP-1 细胞与 160nmol/L 的佛波酯孵育 24h,诱导成贴壁的巨噬细胞后,
用 0µg/ ml、10µg/ml、20µg/ ml、30µg/ ml 的 LDL 处理 THP-1 巨噬细胞,油红 O 染
色检测细胞荷脂情况,免疫荧光检测 THP-1 细胞上 PCSK9 蛋白表达及分布情况,
RT-PCR、Western blot 检测 THP-1 巨噬细胞上 PCSK9、LDLR mRNA、蛋白质的表
达。用 0µg/ ml、10µg/ ml、20µg/ ml、30µg/ ml 的 oxLDL 处理 THP-1 巨噬细胞,油
2
南华大学硕士学位论文
红 O 染色检测细胞荷脂情况,RT-PCR、Western blot 分别检测 THP-1 巨噬细胞上
PCSK9、LDLR mRNA、蛋白质的表达。

结果 0µg/ ml、10µg/ml、20µg/ ml、30µg/ ml 的 LDL 处理 THP-1 巨噬细胞后,
油红 O 染色发现,随着 LDL 浓度的增大,细胞内脂滴数目增多,呈散在分布,免
疫荧光染色发现 PCSK9 在 THP-1 源性巨噬细胞上有较强的表达,并且随着 LDL 浓
度的增加而增多,RT-PCR、Western blot 检测发现,LDL 可以下调 THP-1 源性巨噬
细胞中 LDLR 的表达,呈浓度依赖性,而同时 PCSK9 的表达上调,也呈浓度依赖
性;用 0µg/ ml、10µg/ml、20µg/ ml、30µg/ ml 的 oxLDL 处理 THP-1 源性巨噬细胞,
油红 O 染色发现,细胞里面出现可见脂滴,而且随着 oxLDL 浓度的增大,脂滴颗
粒逐渐增大、增多,聚集成团。在本实验浓度范围内,oxLDL 处理对 THP-1 巨噬
细胞上 PCSK9、LDLR mRNA、蛋白质的表达影响均不明显。