实验 大肠杆菌得培养与分离.doc

:..实验1:大肠杆菌得培养与分离一、,,用固体平面培养基本进行细菌得划线培养。发展要求说明大肠杆菌培养得条件与实验原理。说明二、基本内容微生物得实验室培养培养基无菌技术分离、纯化大肠杆菌培养基得配制配制培养基得原则配制培养基得方法计算→称量→溶化→调pH→分装→加棉塞→灭菌→,按物理性质分:固体培养基与液体培养基(加入琼脂多少)。液体培养基用于扩大培养与工业生产,固体培养基用于菌种分离,鉴定,计数(菌落数量)。培养基得化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。按照微生物得同化作用类型就是自养还就是异养,碳源不同,自养微生物为无机碳源,如硝化细菌就是二氧化碳或碳酸盐,异养微生物为有机碳源,如大肠杆菌就是葡萄糖等有机物。(如细菌大肠杆菌――二分裂、革兰氏阴性、异养兼性厌氧性肠道杆菌、蓝藻、支原体、衣原体、放线菌等)、原生生物(草履虫、变形虫等)、真菌(酵母菌――出芽生殖、异养兼性厌氧性微生物、霉菌、食用菌)、病毒等。细菌就是单细胞得原核生物,有细胞壁(肽聚糖)、细胞膜、细胞质,无成型得细胞核,只有一环状DNA分子(拟核)。以分裂(二分裂)得方式繁殖,分裂速度很快。用革兰氏染色法将细菌分为革兰氏阳性菌(革兰氏染液染色后,再脱色处理,细菌仍保留染色液得颜色)与革兰氏阴性菌两大类,区别在细胞壁得成分不同。大肠杆菌就是革兰氏阴性(细胞壁薄,有荚膜)、兼性厌氧得肠道杆菌。、操作者得衣着与手进行清洁与消毒;将培养器皿、接种用具与培养基等器具进行灭菌;为避免周围微生物污染,实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行;避免已灭菌处理得材料用具与周围物品相接触。比较理化因素得作用强度消灭微生物得数量芽孢与孢子能否被消灭消毒较为温与部分生活状态得微生物不能灭菌强烈全部微生物能灭菌方法: ①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法。 ②玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法,所用器械就是干热灭菌箱。③培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法,所用器械就是高压蒸汽灭菌锅。 ④表面灭菌与空气灭菌等使用紫外线灭菌法,所用器械就是紫外灯。:根据培养得微生物种类、培养得目得等确定培养基得类型与配制量。营养要协调:培养基中各种营养物质得浓度与比例要适宜。pH要适宜:细菌培养基pH中性或偏碱性,霉菌培养基呈酸性。(1)配制培养基:计算→称量→溶化→调pH→分装→加棉塞→灭菌→倒平板(形成斜面就是为增大接种面积)。我们一般用LB液体培养基来扩大培养大肠杆菌,培养后可在LB固体培养基上划线分离。以下为本实验中培养基配置步骤:①称量:准确称取各成分。蛋白胨0、5g,酵母提取物0、25g,***化钠0、5g,加水50ml。配置LB固体培养基时还需加1g琼脂。②溶化:加热熔化,用蒸馏水定容到50mL。配置LB固体培养基时还需加琼脂,整个过程不断用玻棒搅拌,目得就是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。③调pH:用1mol/LNaOH溶液调节pH至偏碱性。④