分子生物学常用技术(简化版).ppt

第19章:分子生物学常用技术--4学时分子杂交、PCR、基因测序蛋白质研究技术(双向电泳,酵母双杂交)基因转移与基因剔除(含RNA)第20章:基因工程--4学时第21章:基因诊断与基因治疗--4学时第四篇:分子生物学技术与应用第十九章分子生物学常用技术分子生物学技术能帮助我们干什么?揭示生物大分子(DNA、RNA、蛋白质)的结构与功能DNA水平:基因序列分析、拷贝数和染色体定位RNA水平:定量分析、基因表达产物的可变剪接分析蛋白质水平:蛋白质定量、定位、功能细胞与整体水平:基因在活体中的功能目的:了解疾病发生的规律,提供治疗与预防手段我们需要了解和掌握哪些基本技术?基本技术:核酸:测序、印迹、杂交、体外扩增技术蛋白质:电泳与印迹、组学技术、相互作用综合技术:基因工程技术转基因生物与基因敲除技术应用技术:基因诊断基因治疗Molecularhybridization:利用已知核酸序列(探针/probe)检测与其互补的未知核酸序列用途:确认核酸序列间同源性对特定核酸序列进行定量自核酸混合体中辨认特定核酸序列第一节:核酸分子杂交一、基本原理变性(denature)复性(renature)杂交(hybiridization)核酸变性在特定变性因素作用下,DNA双螺旋解离的过程破坏氢键与疏水作用可导致变性热变性:高温可使核酸变性,温度高于90℃时任何核酸双链都将变性酸碱变性:pH<3或pH>11时核酸将变性,DNA使用碱变性,RNA则不可化学试剂变性:能够破坏氢键的化学试剂如尿素或甲酰***可使核酸变性变性温度Tm:meltingtemperature,解链温度或变性温度影响变性温度的因素:溶液的离子强度变性温度与离子强度正相关,低盐利于变性DNA分子的GC含量GC%=(Tm-)×,恢复其天然双螺旋结构的过程复性类似与化学反应,需要一定反应时间影响DNA复性速度的因素DNA分子的浓度:浓度高,复性快DNA分子的长度:长片段复性速度慢DNA分子的复杂性:重复序列复性速度快不同物种C0t曲线比较人类基因组C0t曲线