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细菌转化,单克隆挑选及摇菌.doc


文档分类:医学/心理学 | 页数:约3页 举报非法文档有奖
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细菌转化,~100ul菌液于5mlLB试管中,37℃250转/分震荡约3小时,至OD600≈-(透过管能看到手指要挑选细菌活力强时)2、,4℃,4000转/分离心15min(防止菌体破裂),()预冷的CaCl2重悬细菌沉淀,冰浴30min,4℃,4000转/分离心15min,(),轻轻旋转几次以混匀内容物,℃的循环水浴中,,(加入了葡萄糖等物质,比LB培养基更营养,更利于热激后细菌恢复),200转37℃45min,。(玻璃推板充分火焰消毒,待充分冷却后再进行涂板,可将推板贴在平板盖内侧,再用手隔板盖感觉温度)℃培养箱中正置平板,待液体完全干后再倒置平板,培养16小时,将平板取出4℃放置约2小时后观察。挑选单个肉眼能见菌落,坐上在平板上做上标记(菌落不易太大,否则有杂菌混入,培养箱中培养不超过16个小时)12、在超净台内,将细菌挑入LB培养基,一个菌落一支管,180~200转/分钟过夜(12~16个小时,以菌体浑浊为佳)。抽取质粒(抽取质粒时每支LB管也应对应相应的EP管)备注LB培养基制备蛋白胨1%(g/ml)NaCl1%%到此配方为LB培养基(液体)%氨苄青霉素的储存浓度是50~100ug/ul,使用时稀释1000倍,以下步骤在超净台进行,培养液高压灭菌后,待容器不烫手时加入氨苄,轻摇混匀,倒入平板,每板大约20ml如有侵权请联系告知删除,感谢你们的配合!

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  • 时间2020-07-31