猪口蹄疫抗体（FMDV Ab）酶联免疫分析.docx

猪口蹄疫抗体（FMDV Ab）酶联免疫分析.docx猪口蹄疫抗体(FMDVAb)酶联免疫分析试剂盒使用说明书木试剂盒仅供研究使用。96T使用目的:木试剂盒用于测定猪血清、血浆及相关液体样木屮口蹄疫抗体(FMDVAb)表达。实验原理木试剂盒应用双抗原夹心法测泄标木屮猪口蹄疫抗体(FMDVAb)表达。用纯化的猪口蹄疫抗原包被微孔板,制成固相抗原,可与样品中口蹄疫抗体(FMDVAb)相结合,经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的口蹄疫抗原结合,形成抗体•抗原•酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),与CUTOFF值相比较,从而判定标木屮猪口蹄疫抗体(FMDVAb)的存在与否。]瓶10说明书1份5显色剂A液6mlXl瓶11封板膜2张6显色剂B液6mlX1/瓶12密封袋1个标本要求标木采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标木放于・20°C保存,但应避免反复冻融不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孑L(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50卩1。然后在待测样品孔先加样品稀释液40卩1,然示再加待测样品lOglo加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,温育:用封板膜封板后置37°C温育30分钟。配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸憎水30倍稀释后备用洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒示弃去,如此重复5次,拍干。加酶:毎孔加入酶标试剂50卩1,空白孔除外。温育:操作同3。洗涤:操作同5。显色:每孔先加入显色剂A50yl,再加入显色剂B50M,轻轻震荡混匀,37°」上:每孔加终止液50卩1,终止反应(此时蓝色立转黄色)。测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。作