常用微生物染色方法.ppt

常用微生物染色方法泰兴市人民医院检验科微生物室刘鸿丽1、革兰染色2、抗酸染色3、墨汁染色革兰氏染色草兰氏染色原理通透性学说二等电点学说三化学学说LPS磷壁酸肽聚糖层磷脂层G-/G+细菌细胞壁比较示意图革兰氏阳性菌细胞壁结构比较原理致密,肽聚糖层很厚,脂类含量通透性学说较少,酒精不易渗入,而且95%咆酒精可使细胞壁脱水,间隙变小学通透性降低,阻碍结晶紫-碘复合物渗出;革兰氏阴性菌细胞壁结构比较疏松,肽聚糖层很薄,外膜、脂蛋白、脂多糖均含有大量脂质,易被酒精溶解,致使细胞壁通透性增高,细胞内的结晶紫碘复合物被酒精溶解洗出而脱色原理革兰氏阳性菌等电点(pH2学说3)比革兰氏阴性菌等电点等电点学说(pH45)低,加之媒染剂化学学说碘为弱氧化剂能降低革兰氏阳性菌的等电点,因此在同样的pH的染色环境中,阳性菌所带负电荷比阴性菌多,与带正电荷的结晶紫染料能牢固结合,不易被酒精脱色原理逦透性学说革兰氏阳性菌含有大量核糖等电点学说核酸镁盐,其可与结晶紫-碘三化学学说结合成大分子复合物,因而不易被95%酒精脱色;而阴性菌中此物质含量较少,因而吸附染料量很少,分子量也较小,故易被酒精脱色细菌涂片的制备涂片:取一张洁净载玻片,用已灭菌的接种环取一环生理盐水于玻片中央,再将接种环灭菌,取菌与生理盐水磨匀,涂布成1cmⅹ1cm大小区域的均匀薄膜,使盐水磨成灰白色为宜,接种环灭菌后放回试管架干燥:涂片最妤在室温下自然干燥或将标本片涂抹面向上,置酒精灯火焰上半尺高处慢慢烘干。■固定:常用火焰加热法,手执载玻片一端,标本面向上,迅速来回通过火焰三次。注意点1取菌量不可太多,涂片应均匀,,,以防涂抹面烧焦及玻片烧裂固定的目的杀死细菌,使菌体蛋白凝固,染料易于着色改变细菌通透性,以利于染料进入细胞内使菌体与玻片粘附牢固,在染色时不致被染料和水冲掉