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TaKaRa Code: D9108A RNAiso Plus (Total RNA 提取试剂) 说明书 宝生物工程(大连)有限公司 目录 内容 页码 ●制品说明 1 ●制品组成 1 ●保存和运输 1 ●RNA 提取实验前的准备 1 ●实验操作 2 ●RNA 提取操作流程图 3 ●实验例 4 ●Troubleshooting 5 ●参考文献 6 注意事项本制品中含有苯酚,具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会中毒、导致灼伤以及其他身体伤害。使用本制品时应穿戴防护物品,如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛时, 应立即用大量的水冲洗以及前往医院治疗;接触到皮肤时,应立即用大量的聚乙二醇 400(Polyethylene glycol 400)冲洗,严重时请前往医院治疗;使用本制品后感觉不舒服时请前往医院治疗。●制品说明 RNAiso Plus 是广谱型Total RNA 提取试剂。实验操作快速方便,颜色鲜明,便于分层。 本制品可以从动物组织、植物材料、各种微生物、培养细胞等中提取Total RNA。样品在RNAiso Plus 中能够充分被裂解,在加入***仿离心后,溶液会形成上清层、中间层和有机层(鲜红色下层) ,RNA 分布在上层中,收集上清层后,经异丙醇沉淀便可以回收得到Total RNA。 清 RNAiso Plus 具有以下特性: 1. 广谱性强。可以从动物组织、植物材料、各种微生物、培养细胞等中提取Total RNA。 2. 纯度俱佳。提取的Total RNA 纯度高,基本不含蛋白质及基因组DNA,可以直接用于Northern 杂交、斑点杂交、mRNA 纯化、体外翻译、RNA 分解酶的保护分析、RT-PCR、构建 cDNA 文库等各种分子生物学实验。 3. 快速简便。实验操作快速方便,整个操作在一小时内便可完成。 4. 颜色鲜明。加入***仿离心后,会形成无色的上清层和鲜红色的下层(有机层) 。 ●制品组成 RNAiso Plus* 100 ml * RNAiso Plus 中含有强变性剂,应避免与皮肤、衣物等接触。若 不小心接触到眼睛或皮肤时,请立即到医院进行处理。 【试剂盒之外所需准备试剂】 ◆ ***仿 ◆ 异丙醇 ◆ 75%乙醇(DEPC处理水配制) ◆ RNase-free水(制备方法:使用RNase-free的玻璃瓶,向超纯水中加入DEPC至终浓度0. 1%(v/v), 过夜搅拌后,高温高压灭菌。) ●保存和运输 1. 可以在室温下保存,建议在2-8℃下避光保存,效果更佳。 2. 可以在常温下运输。 ●RNA 提取实验前的准备 RNA 制备的关键是要抑制细胞中的RNA 分解酶和防止所用器具及试剂中的RNA 分解酶的污染。因此,在实验中必须采取以下措施:戴一次性干净手套;使用RNA 操作专用实验台;在操作过程中避免讲话等等。通过以上办法可以防止实验者的汗液、唾液中的RNA 分解酶的污染。 【使用器具】 尽量使用一次性塑料器皿,若用玻璃器皿,应在使用前按下列方法进行处理。 (1) % DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃下处理12 小时。 (2) 然后在120℃下高压灭菌30 分钟以除去残留的DEPC。 RNA 实验用的器具建议专门使用,不要用于其它实验。 【试剂配制】 用于RNA 实验的试剂,须使用干热灭菌(180℃,60 分钟)或使用上述方法进行DEPC 水处理灭菌后的玻璃容器盛装(也可以使用RNA 实验用的一次性塑料容器),%的DEPC 处理后再进行高温高压灭菌。 RNA 实验用的试剂和无菌水都应专用,避免混用后交叉污染。 -1- ●实验操作 1. RNAiso Plus的使用量情况如下。 样品量 RNAiso Plus 使用量( ml ) 10 cm 2的贴壁培养细胞 1 10 7的悬浮培养细胞 1~2 100 μl 的白细胞 2 100 μl 全血 2 50~100 mg 的普通组织样品 1 50~100 mg 的特殊组织样品(肝、脾、骨及软骨等) 2 15~30 mg 的植物材料(多糖和多酚含量不高的) 1 2. 实验样品的研磨和匀浆。 A. 贴壁培养细胞① 倒出培养液,用1×PBS 清洗一次。 ② 每10 cm 2生长的培养细胞中加入1 ml的RNAiso Plus,水平放置片刻,使裂解液均匀分布于 细胞表面并裂解细胞,然后使用移液枪吹打细胞使其脱落(对于贴壁牢固的培养细胞可用细胞刮勺剥 离细胞) 。 ③ 将内含细胞的裂解液转移至离心管中,用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀。 ④室温静置5 分钟。