三叶因子蛋白在毕赤酵母GS115中高效表达--毕业论文.doc

学号:2008xxxxxxx
潍坊医学院本科生毕业论文(设计)
题目:三叶因子蛋白在毕赤酵母GS115中高效表达

姓名
xxx
专业
xxx
年级、班级
2008级
部、系(院)
xxxxx
指导教师姓名
专业技术职务
xxx 副教授
2012 年 6 月 4 日
潍坊医学院本科生毕业论文(设计)诚信声明
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论文作者签名: 日期: 年月日
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论文作者签名: 日期: 年月日
指导教师签名: 日期: 年月日
目录
中文摘要…………………………………………………………………………………1
英文摘要…………………………………………………………………………………2
1引言……………………………………………………………………………………3
2材料……………………………………………………………………………………4
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3方法……………………………………………………………………………………6
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SDS-PAGE电泳检测重组蛋白……………………………………………………7
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4结果……………………………………………………………………………………9
……………………………………………………9
…………………………………………………………9
5讨论……………………………………………………………………………………11
6结论…………………………………………………………………………………13
参考文献………………………………………………………………………………14
附图表…………………………………………………………………………………15
综述……………………………………………………………………………………17
致谢……………………………………………………………………………………21
摘要
目的:三叶因子蛋白在巴斯德毕赤酵母菌株GS115中摇瓶培养并甲醇诱导表达,筛
选出三叶因子蛋白高效表达的菌株。
方法:以pPICZα为载体,构建三叶因子蛋白真核表达质粒,经SacI 线性化后电转化毕赤酵母GS115感受态细胞,涂布MD平板,得到70个转化子。分别接种到试管中恒温摇动培养24h,再接种到摇瓶BMGY培养基中振荡培养36h,最后转接到BMMY培养基,诱导培养96h,分别在培养24h、48h、72h和96h四个时间点补加甲醇进行诱导表达,SDS-PAGE电泳检测目的蛋白表达情况,从而筛选出三叶因子蛋白高效表达的菌株。筛选出的工程菌株经上述方法诱导培养,摸索三叶因子蛋白在毕赤酵母GS115诱导表达的最适时间。
结果:离心培养液,收集上清进行SDS-PAGE电泳,电泳图谱上能清楚的看到目的蛋白表达条带。
结论:三叶因子蛋白在巴斯德毕赤酵母菌株GS115获得高效表达。并筛选出高效表
达三叶因子蛋白的工程菌株,为对三叶因子蛋白进一步功能研究奠定了基础。
关键词:巴斯德毕赤酵母菌株GS115;三叶因子蛋白;甲醇;SDS-PAGE电泳。
Abstract
Objective: Trefoil factor protein in Pichia pastoris yeast strain GS115 shake flasks a