几种虫草无性型真菌菌丝中天然色素的研究.pdf

安徽农业大学
硕士学位论文
几种虫草无性型真菌菌丝中天然色素研究
姓名:王小董
申请学位级别:硕士
专业:微生物学
指导教师:胡丰林
2011-06
摘要
虫草是一类具有很高药用价值、应用前景广泛的真菌。本研究对粉被虫草分离菌
株 RCEF4585、双梭孢虫草分离菌株 RCEF4337 及珊瑚虫草分离菌株 RCEF4022 菌丝
体中的天然色素进行了系统性研究,具体内容主要包括:菌丝色素粗提取 HPLC-MS
分析;色素组分分离纯化;色素组分的鉴定;色素组分稳定性研究。
通过HPLC-ESI-MS分析发现,菌株RCEF4585 菌丝体甲醇粗提物中的天然色素物
质并非单一的化合物,而是多种黄色色素的混合物,主要色素化合物的分子式为
C26H32O9,其紫外特征吸收峰分别为 228nm、260nm、413nm、434nm。根据化合物
的分子式和特征吸收波长,查询Chapman&Hall天然数据化合物,未发现相匹配的已
知化合物,初步判断该化合物是一新化合物。
菌株RCEF 4022 甲醇粗提物经HPLC-MS分析发现,提取物中只含有一种色素物
质,质谱分析得出其分子式为C30H18O12,对应紫外特征吸收峰 225nm、266nm、297nm、
467nm。根据该化合物的分子式和特征吸收波长查询,发现该化合物与Dicatenarin衍
生物 2,2',4,4',5,5'-Hexahydroxy-7,7'-dimethoxy-1,1'-bianthraquinone一致,为羟基蒽醌类
色素。该化合物从虫生真菌中分离得到尚属首次。
HPLC-ESI-MS分析结果表明RCEF4337 甲醇粗提物中的主要天然色素物质和
RCEF4585 菌丝甲醇提取物中色素物质一致。该菌菌丝乙酸乙酯粗提物中的主要色素
化合物为C30H18O13,其对应的特征吸收峰为 225nm、266nm、297nm、503nm。根据
该化合物的分子式和紫外特征吸收波长,查询Chapman&Hall天然数据库,未发现相
匹配的已知化合物,初步判断该化合物是一新化合物。
对菌株RCEF4585 菌丝中的目标色素物质P-1 进行了分离,溶剂体系
为V(乙酸乙酯):V(正丁醇):V(甲醇):V(水)=10:3:3:10,以其下相为流
动相,上相为固定相,转速 850r/min,流速为 2mL/min,紫外检测波长 340nm。利用
Semi-Preparation HPLC方法对菌株RCEF4022 和菌株RCEF4337 菌丝提取物中色素物
质进行纯化分离,共分离得到两个化合物P-2 及P-4。经HPLC峰面积归一化法计算出
三个化合物的纯度都达到 95%以上,高分辨HPLC-MS分析结果表明所得到的三个色
素化合物分子式分别为C26H32O9、C30H18O12以及C30H18O13。此三个色素化合物的紫
外特征吸收和分子式与粗提物中对应的色素化合物相一致,表明所得色素化合物在分
离过程中未被破坏。经化学显色反应鉴定所得三种色素化合物都是蒽醌类物质。
对色素P-4 的稳定性研究表明,该色素物质易溶于甲醇、乙腈、乙酸乙酯等有机
溶剂;高温和氧化剂对色素化合物的稳定性有一定的影响;金属离子对色素物质稳定
性影响的实验中发现,Fe3+的存在会使最大吸光度略有降低,大多数金属离子对色素
稳定性影响不大。
I
关键词:粉被玛利亚霉,双梭孢隔梭孢,珊瑚虫草,天然色素,HPLC-MS,,
稳定性






































II
Abstract
A series studies were carried out on natural pigments from mycelia of three fungi
RCEF4585 、 RCEF4337 、 RCEF4022 isolated from Cordyceps pruinosa Petch 、
Septafusidium bifusisporum 、 Cordyceps martialis Speg., respectively. The studies
included HPLC-MS analysis of the crude extraction; isolation of the target pigment;
identification of the pigment; stability