BMI1基因在喉鳞状细胞癌与肿瘤干细胞中的研究.pdf

复旦大学
博士学位论文
BMI1基因在喉鳞状细胞癌及肿瘤干细胞中的研究
姓名:陈慧
申请学位级别:博士
专业:耳鼻咽喉科学
指导教师:周梁
2012-04-05
中文摘要基因在喉鳞状细胞癌及肿瘤干细胞中的研究第一部分人喉鳞状细胞癌中基因的检测方法收集人喉鳞状细胞癌肿瘤标本和癌旁组织,免疫荧光染色法定性检测目的探讨人喉鳞状细胞癌标本中基因的表达情况及基因的表达与喉癌的临床分期与分型之间的关系。基因在喉癌标本中的表达情况,.蚖从分子水平和蛋白水平定量比较基因在喉癌标本与正常癌旁组织中的表达情况,以及的表达情况与临床分期与分型之间的关系。结果取得例喉鳞状细胞癌标本和例正常癌旁组织标本。,声门上型标本例。肿瘤组织进行基因免疫荧光染色观察可见基因普遍表达。.,但是声门型与声门上型中表达的比较不具有显著差异。,其表达程度与肿瘤的临床分期有关,但是与肿瘤的分型无明显关系。【关键词】喉鳞状细胞癌;免疫荧光染色;.
第二部分蚨杂谌撕戆〩细胞系的作用目的将细胞与扇畔赴斜冉希芯緽蚨杂谌撕戆〩.细胞系的作用。方法构建慢病毒载体,扇攀购戆〩.赴档腂虮泶锵碌鳌正常培养细胞和细胞于孔板上,在、天观察生长状态并用ú舛ㄏ赴脑鲋匙刺S糜邢尴∈头ń嘌装逯械牧街窒胞制成单个细胞悬液并培养埽鄄炜寺⌒纬赡芰Σ⒂牍潭ú饬靠虮冉霞扑忝积比。将细胞与细胞培养后用虵瓵旧ǎ较细胞凋亡能力。染色后用流式细胞仪比较两种细胞的周期分布情况。两种细胞培养后接受剂量为和腦射线放疗,小时后以法测吸光度值并计算抑制率,比较对放疗的耐受性。两种细胞中加入痬痬乃巢⑸湟海嘌∈焙笠訡一ū冉隙曰频哪受性。将的和细胞分别注入只疭∈,并且有停止生长趋势。单个和细胞在孔板中培养芎观察并用固定测量框比较面积比,可见细胞形成细胞球体积显著减小,,.旧êê笥昧魇较赴羌觳饬阶橄赴闹芷诜植迹果显示细胞处于/期的细胞比例显著增高,诤虶疢期的比例都显著降低。经和姆帕坪驲赴苑帕频囊种菩韵灾黾印痬乃巢坪蠼峁允舅孀偶亮康脑黾樱琑细胞的抑制率在各个剂量都比高。体内成瘤实验结果显示组形成的肿瘤体积明显减小,,促进期凋亡,促使细胞在/期聚集,减少对放化疗的耐受性,并且能够抑制体内成瘤能力。【关键词】
人喉癌细胞系肿瘤干细胞中基因的检测第三部分目的探讨与诤戆┍瓯局械墓餐泶锴榭鲆约癇贑喉癌干细胞中的表达情况。方法与诤戆┍瓯局薪忻庖哂ü馊旧ǎü庀晕⒕岛图す夤簿焦显微镜下观察。流式细胞仪检测喉癌细胞与细胞中细胞率并进行分选。培养观察分选后的细胞,.考觳饬阶橄赴南喽员泶锪浚约案上赴騈蚉南喽员泶锪俊结果和诤戆┍瓯局泄餐泶铮渲蠧在细胞膜上表达,主要在细胞的细胞核中。.峁允綛贑细胞中的表达量显著高于赴,而和在和赴械谋泶锪棵挥型臣蒲Р钜臁结论与诤砹圩聪赴┲泄餐泶铮⑶褺饕1泶镉喉癌干细胞中对其发挥作用。和对于喉癌干细胞没有特异性作用。【关键词】缓戆└上赴幻庖哂ü
第四部分基因对于人喉癌细胞系肿瘤干细胞的作用球能力明显比疉瓹赴俊畉目的探讨基因对于喉癌干细胞的作用以及对于相关基因和信号通路的影响。方法流式细胞仪检测细胞和细胞中喉癌干细胞的含量并分选。培养分选后的干细胞,比较成球能力。、蚦的表达量,分析对信号通路的影响。『笙赴嘌鄄旆⑾諬瓹赴纳に俣群统峁允綬细胞中谋泶锪肯灾跎,同时在细胞中,。结论沉默导致了喉癌干细胞的减少,从而抑制了肿瘤细胞的增殖、促进其凋亡并且减弱了对放化疗的耐受性,同时对疉/藕通路的调控发挥重要作用。【关键词】喉癌干细胞;流式分选;籶:
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