smac和xiap与卵巢癌细胞耐药及凋亡关系研究.pdf

天津医科大学
硕士学位论文
Smac和XIAP与卵巢癌细胞耐药及凋亡关系的研究
姓名:强娟
申请学位级别:硕士
专业:临床医学;妇产科学
指导教师:张虹
2012-05
中文摘要觳釹隭谏掀ば月殉舶┠鸵┫赴鸖/捌淝妆鞠胞械谋泶锊钜臁菇ê墒霺蔚恼婧吮泶镌靥錺疎,转染上皮性卵巢癌耐药细胞疍。鄄熳H就庠葱許蚨陨掀ば月殉舶┠鸵┫赴鸖隭鞍表达变化,探讨与卵巢癌耐药及凋亡机制。方法:甅法分别检测上皮性卵巢癌耐药细胞疍和亲本细胞的,计算耐药指数。捎肦方法分别从基因和蛋白水平检测卵巢癌细胞系捌淠鸵┫赴礢/蠸疍隭谋泶锼ü讲椒≧竦贸墒霺乃磂O拗菩阅谇忻窴对双链和质粒./进行单酶切,将纯化回收的和质粒的目的片断用用噶樱;疶猅惺态,进行质粒的扩增和测序。捎弥侍遄H痉ń玴疎真核表达载体导入卵巢癌顺铂耐药细胞系疍。运用法检测转染前后细胞内与表达的变化,ḿ觳釹泶镌黾雍螅赴ひ种坡剩鄄基因对卵巢癌细胞凋亡的影响。结果:甋/哪鸵┲┦笛椤甋、疍细胞系中均表达/与,且晒菇ㄐ墒霺δ芷蔚恼婧吮泶镌靥濉>庑蚣ǎ公布的序列。甒检测转染后耐药细胞蛋白表达增加,表达无明目的:的差异。中的相对含量高于疍。蠿南喽院康陀天津医科大学硕士学位论文疍。
骯进而起到促凋亡作用。关键词:卵巢癌/甅结果转染后细胞生长抑制率出现明显增加,:蛋白功能检测表明,在体外培养的卵巢癌耐药细胞中表达降低,表达增加。表达的上调对卵巢癌细胞表达无明显影响,但对肿瘤细胞生长有明显的抑制作用。提示确实促进卵巢癌细胞凋亡,但其凋亡机制并不是促进降解,而是与相互结合抑制其与岷希せ天津医科大学硕士学位论文显改变。细胞凋亡耐药
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———————————————————————————————————————————一~缩略语英文缩写覲半胱氨酸蛋白酶的第二具有低等电点的凋亡结合蛋白的直接抑制剂凋亡抑制蛋白家族天冬氨酸特异半胱氨酰上皮性卵巢癌二甲基亚砜乙二胺四乙酸磷酸盐缓冲液顺铂艘蜃樱甂甲基噻唑基四唑二乙基焦碳酸酯信使核糖核酸逆转录聚合酶链反应苯甲基磺酰氟脱氧核糖核苷酸英文全称中文译名个线粒体激活因子蛋白酶溴化已锭胎牛血清碱性磷酸酶绿色荧光蛋白互补天津医科大学硕士学位论文—.颉猙,
研究现状、成果刖吾卵巢恶性肿瘤为女性生殖系统三大恶性肿瘤之一,其发病率不高,居第三位,占女性常见恶性肿瘤的%~%,而病死率却高居首位称为“沉默杀手”。左右。其起病隐匿易于广泛扩散和转移的特性,早期缺乏典型的临床症状%~%就诊时已属晚期。目前对卵巢癌的治疗临床上主要是以肿瘤细胞减灭术为主加用化疗、放疗的综合治疗,其中以铂类为主的化疗是卵巢癌主要的辅但晚期患者的晟媛嗜匀缓艿停渲匾T蚓褪侵琢鱿赴对药物所致的细胞凋亡产生了抵抗性,即化疗耐药性。通过调控相关的细胞凋亡调控因子,为临床肿瘤治疗提供了有效途径。在生物体中,凋亡赴绦蛐运劳是消灭损伤细胞维持微环境稳定的重要因素V琢龅男纬墒且桓龆嘁蛩兀嗖街璺⑸⒄沟墓蹋谥疃嘁蛩中,其中一个最重要的就是细胞凋亡机制的紊乱。家族是一类具有抗凋亡作用的蛋白,而被认为是中最具有潜在抑制活性的一种蛋白。人类/的基因由鐾庀宰幼槌桑挥湃旧宄け邸3跏急嗦氲蛋白含有霭被岵谢浒被┒霭被嵛O吡L宓陌行蛄K苋繁ㄎ挥谙吡L澹谧T说线粒体后涣呀猓钪丈珊个氨基酸残基的成熟蛋白。因此,以全长型和成熟型两种形式存在,全长型没有活性,成熟的是以二聚体的形式存在的一种更拉长的拱形结构,的单体和二聚体均能识别并作用于的,能与和序列结合的霭被岵谢甈.⒖狪挥诎被┒耍庵纸峁沟男纬啥許隭腂蛄邢嗷プ饔茫解除对活性抑制。是促凋亡所必需的【浚在目前研究的多种凋亡相关因子中,对肿瘤细胞的凋亡起到关键作用,并与肿瘤耐药机制密切相关,上调表达既可促进肿瘤细胞凋亡也增加了对化疗药物的敏感性。国内外已有多种利用及其蛋白衍生物促进肿瘤细胞凋亡的基础研究,利用与家族的相互关系,指导肿瘤基因治疗这一新天津医科大学硕士学位论文上皮性卵巢癌占原发性卵巢恶性肿瘤的%助治疗方法,途径。.‘上狫一’
研究目的、方法本课题前期研究已证实在恶性上皮性卵巢肿瘤、良性上皮性卵巢肿瘤、正常卵巢组织中的表达与预后,结果显示在恶性上皮性卵巢肿瘤与良性上皮性卵巢肿瘤中均有表达,而在正常卵巢组织中表达为阴性,并且恶性卵巢组织中表达明显高于良性卵巢肿瘤。正常卵巢、良性卵巢肿瘤、交界性卵巢肿瘤及卵巢癌组织中均有表达。正常卵巢组织中表达水平显著高于交界性卵巢肿瘤及卵巢癌组织。良性卵巢肿瘤组织表达水平显著高于卵巢癌组织。表达水平随着临床分期和病理分级的增高而降低,且低表达与卵巢癌不良预后有关。耐药细胞疍中的表达明显低于亲本细胞