重组人促红细胞生成素对急性脑缺血大鼠脑梗死体.doc

重组人促红细胞生成素对急性脑缺血大鼠脑梗死体积及Nrf2、HO-1表达的影响摘要:目的研究重组人促红细胞生成素(rhEPO)对急性脑缺血大鼠脑组织中核因子E2相关性因子2(Nrf2)及血红素加氧酶(HO1)表达的影响,探讨rhEPO的抗氧化作用机制。方法随机将36只雄性SD大鼠分为假手术组、缺血组和rhEPO治疗组。采用线栓法制作大鼠永久性局灶性脑缺血(pMCAO)模型。rhEPO治疗组在缺血2h后腹腔注射rhEPO5000IU/kg,模型组和假手术组在等时间点给予等量的生理盐水。TTC(2,3,5***化三苯基四氮唑)法测量脑梗死体积,免疫组化方法测定脑组织中Nrf2及HO1的表达。结果rhEPO治疗组与缺血组相比,脑梗死体积减小,各组脑组织中Nrf2及HO1的表达量按假手术组、缺血组、rhEPO治疗组依次增高,各组间差异均具有统计学意义(P 关键词:脑缺血;重组人促红细胞生成素;E2相关性因子2;血红素加氧酶;Keap1Nrf2/ARE抗氧化系统中图分类号::A文章编号:16721349(2012)08096902 氧化应激在急性缺血性脑损伤中发挥了重要的作用[1]。近年来有大量研究证实,重组人促红细胞生成素(rhEPO)在缺血性脑损伤中发挥了抗氧化作用[2],但其作用机制仍不清楚。本研究采用大鼠永久性局灶性脑缺血(pMCAO)模型,通过对缺血脑组织中脑梗死体积、核因子E2相关性因子2(Nrf2)及血红素加氧酶(HO1)表达的研究,探讨rhEPO在缺血性脑损伤的抗氧化作用机制。 1材料与方法 (山西医科大学实验动物中心提供),体重230g~270g。 (北京四环生物制药有限公司),Nrf2、HO1兔抗鼠多克隆抗体(北京博奥森生物技术有限公司,免疫组化用),PV6001二步法免疫组化检测试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司),辣根过氧化物酶标记的二抗(北京中杉金桥生物技术有限公司)。 (n=12)、缺血组(n=12)和rhEPO治疗组(n=12)。每组随机选取6只行免疫组化。 [3]制备pMCAO模型。大鼠在术前24h禁食,术前4h禁水,10%的水合***醛()腹腔注射麻醉后,仰卧位,取颈正中切口,A)、颈外动脉(ECA)、颈内动脉(ICA)。A近心端,用动脉夹夹住ICA,在CCA近分叉处约5mm处剪一“V”型小口,,从CCA分叉处计算,插入18mm~20mm时稍遇阻力即可停止,A,逐层缝合筋膜、皮肤,建立pMCAO模型。假手术组除插入鱼线约10mm外,其余操作与缺血组相同。rhEPO治疗组在缺血2h时腹腔注射rhEPO5000IU/kg,假手术组与缺血组则给予等量的生理盐水。参考ZeaLonga评分标准,评分为0分和4分者均剔除。缺血24h后处死大鼠。 ,各组随机取6只在相应时间点心脏灌注去血后,断头取脑,经10%中性甲醛固定24h后,取视交叉后1mm~4mm脑组织,石蜡包埋,切片行免疫组化。 %水合***醛麻醉后断头取脑,以生理盐水冲洗后