DNA甲基化和组蛋白修饰调节牛ZAR1基因表达研究.pdf

内蒙古大学
硕士学位论文
DNA甲基化和组蛋白修饰调节牛ZAR1基因表达的研究
姓名:辛鹏慧
申请学位级别:硕士
专业:动物学
指导教师:于海泉
20090601
谆妥榈鞍仔奘蔚鹘谂虮泶锏难芯摘要合子阻滞因子琙是卵母细胞特异的母性效应基,在胚胎早期发育的母型合子转变中起重要作用。牛是单拷贝基因,位于第六号染色体,基因全长,编码序列为,具有四个外显子,瞿含子,包含的开放阅读框,编码霭被岬那疤宓鞍住8玫鞍拙哂在进化上保守的植物同源结构域砻鱖哂凶B嫉鹘诘淖饔茫珼甲基转移酶和组蛋白去乙酰化酶可能通过冉峁褂蛞种苹蜃B肌基因编码区有大量的回文序列,能够形成茎环结构和十字结构从而改变象,也可能直接和蛋白质相互作用。短回文序列具有核受体的岷嫌颍节核受体的表达。该基因欠肭蠻蛄泻投嗑弁严佘栈<蛋白的翻译有关。在小鼠卵巢中特异表达,在睾丸中不表达,∈罂梢源婊睿但却是不育的。士小鼠在卵巢发育、卵母细胞发生和受精后的早期阶段虽然正常,但大多数来自善雌性的胚胎都阻滞于合子期,约有少于%的胚胎到达赴冢ú荒芊⒂细胞。牛在多种组织中表达,如心脏、睾丸、卵巢、骨骼肌,在胚胎发育不同阶段也有表达,有关该基因表达调控的表观遗传学机制还未见报道。本试验利用,亚硫酸盐测序畇⑷旧拭庖吖渤恋仁笛榧际醵猿赡昱W橹衂虮泶情况及该基因骺厍腄甲基化和组蛋白修饰进行研究,并利用实时定量椒ḿ觳飧没蛟谂B涯赶赴疤逋馐芫咛ブ械膍泶锏亩化。.内蒙古大学硕士学位论文一
片等多种方法,其中实时荧光定量际醪唤瞿芙谐醪蕉垦芯浚矣氤蛟谂W橹械谋泶利用检测成年牛心脏、肾脏、肝脏及睾丸中基因的表达。结果显示基因具有组织特异性表达:基因在睾丸中表达较高,肾脏和心脏较低,肝脏中未检测到表达。駾甲基化状态谆堑骺鼗虮泶锏囊恢址绞剑饕7⑸贑位点的胞嘧啶的第鎏荚由希珼甲基化并不改变基因的碱基序列,而是通过调节基因的表达影响其功能。本试验选定基因骺厍械鯟位点,以亚硫酸盐处理的基因组为模板,进行⒉庑颍觳釩位点的甲基化状态,结果显示:心脏中的甲基化程度明显高于其他三种组织,说明该调控区基化与牛基因的组织特异性表达相关。蜃榈鞍仔奘巫纯组蛋白修饰是另一种重要的表观遗传调节机制,组蛋白修饰通过改变染色体的构象从而影响转录因子与慕岷侠吹鹘诨虮泶铩R话闳衔#琀酰化与基因活化有关,而甲基化与基因沉默有关。本试验利用染色质免疫共沉淀方法对成年牛组织中基因骺厍乙酰化、甲基化状况进行了检测。结果显示在检测的组织中心脏组织乙酰化程度较高,肝脏中较低。乙酰化较高可能与在心脏中有表达相关;肝脏中乙酰化程度较低可能与肝脏中未检测到的表达相关。本试验中没有在四种组织中检测到甲基化,甲基化与基因沉默相关,这一结果与基因在所检测的牛的几种组织中的广泛表达相一致。有研究表明甲基化最主要作用靶标是卫星簇和编码区,而不是编码蛋白基因的启动子区,本研究所检测的调控区可能不是甲基化的主要修饰位点。⑴B涯赶赴衂虻谋泶研究基因表达的方法有杂交、实时荧光定量盎蛐辛鹏慧谆妥榈鞍仔奘蔚鹘谂虮泶锏难芯
规啾忍匾煨院土槊粜愿俊1臼匝椴捎檬凳庇ü舛縋方法检测了在牛卵母细胞成熟过程中五个时期、、.、的表达状况。在生发泡和第一次减数分裂前中期表达量较高且有显著差异,而在第一次减数分裂中期、末期和第二次减数分裂中期表达量较低且没有显著差异。⑴L逋馐芫咛ブ衂虻谋泶是胚胎发育的关键基因之一,检测的表达状况为其功能研究提供一些依据。本试验应用实时荧光定量椒ḿ觳饬伺L逋馐芫咛ブ衂基因的表达状况。、赴斜泶锪拷细撸且有显著差异,而在桑椹胚和囊胚中表达量较低,且无显著差异。综上所述,是卵母细胞特异性母性效应基因,在胚胎早期发育的母型合子转变中起重要作用。本研究表明牛基因的表达具有组织特异性,在心脏、肾脏、睾丸中有表达,肝脏中未检测到。对基因骺厍腄甲基化和组蛋白修饰的研究结果表明二者与的组织特异性表达调控相关。在牛卵母细胞成熟和早期胚胎发育中的表达具有动态变化,生发泡期表达量较高,随着减数分裂的进行表达量逐渐降低。值得注意的是,与谙啾。细胞期的水平明显升高,推测可能与母型合子转变有关。关键词:牛基因,谆榈鞍仔奘危橹匾煨员泶内蒙古大学硕士学位论文
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缩略词表内蒙古大学硕上学位论文
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