改良双抗体夹心法检测可溶性抗原.ppt

ELISA双体夹心法检测扰愿
王春
复旦大学免疫学系
复旦大学免疫生物学研究所
<<细胞与分子免疫学技术>>
联免疫吸附宴验
(Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay, ELISA)
种固相酶免疫测定技术,利用酶标记的抗原或者
抗体,在固相载体上定量或定性测定特异性抗体、可溶
性抗原及细胞表面抗原。
1971年由瑞典学者 Engraft和 Perlmann,荷兰学者
wieman和 Schuurs报道;
开创了运用酶标记免疫技术进行液体标本中微量物
质测定的实验方法;
基本原
」 ELISA_撬原(Ag)或撬体(Ab)三要素
日抗原或抗体的相化:已知的Ag/Ab结合到固相载体
表面,并保持其免疫活性;
口抗原或抗体的酶标记:酶标Ag/Ab,并保持其免疫活性
和酶活性;
口底物显色:底物被酶催化成为有色产物定性和定量
放大免疫反应的信号
基本特点
高度特异性:保持抗原抗体反应的特异性
高灵敏度:酶催化底物显色的高效性,
p***平微量检测
>定性定量检测:反应液颜色深浅或光密度值
基本类型
抗体测定法
间接法检测特异性抗体
°抗原测定法
〉直接竞争法检测可溶性抗原
双抗体夹心法检测可溶性抗原
(改良双抗体夹心法检测可溶性抗原)
应用生物素-亲和素双抗体夹心 ELISA法
间接法检测特异性抗体
包被已知抗原
与待测抗体孵育
洗涤
待测抗体洗涤
洗涤
底物
+substrate
与酶标抗体孵育
加入底物
显色
优点
」
相应抗体的方法

缺点:
可重复性差
通常用于抗体效价的检测和某些疾病的早期诊断
基本类型
抗体测定法
间接法检测特异性抗体
°抗原测定法
直接竞争法检测可溶性抗原
双抗体夹心法检测可溶性抗原
(改良双抗体夹心法检测可溶性抗原)
应用生物素-亲和素双抗体夹心 ELISA法
直接竟争法检测可溶性抗原
A组
孵育洗涤
99
009990
抗原与酶标抗原混合物
信号弱
包被特异性抗体
丫铜解争9
信号强
原理:待检抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合;待检抗原含
量愈多,结合在固相上的酶标抗原愈少,最后的显色也愈浅