PTEN基因抗白血病作用及其机制研究.pdf

河北医科大学
博士学位论文
PTEN基因抗白血病作用及其机制的研究
姓名:成志勇
申请学位级别:博士
专业:内科学
指导教师:潘崚
20090401
基因抗白血病作用及其机制的研究摘要背景:与张力蛋白同源的号染色体缺失的磷酸酶基因,橇姿崦讣易中发现的首个抑癌基因,蛋白具有蛋白磷酸酶和脂质磷酸酶双重活性,其脂质磷酸酶活性可以将,姿崃字<〈位上的磷酸基团去掉,使转化为二磷酸磷脂酰肌醇,此功能在于调控细胞的增殖与凋亡。其蛋白磷酸酶活性可以抑制丝裂原活化蛋白激酶、黏着斑激酶牧姿峄鹘谙赴那ㄒ萍梆附。通过上述多种信号传导通路影响细胞生长、分化、黏附及细胞周期进程,抑制肿瘤细胞增殖、侵袭、转移,并促进肿瘤细胞凋亡。研究发现在多种实体瘤中存在基因的突变、等位基因的缺失或低表达,从而影响其肿瘤抑制功能,并与部分肿瘤的预后不良密切相关。近年来在造血系统肿瘤,如白血病发病中的作用逐渐受到重视,研究表明基因在白血病中存在不同程度的缺失、低表达、甲基化,而突变罕见。造血细胞基因突变或缺失的小鼠最初可以出现类似于人类骨髓增殖性疾病硐郑婧笞;<毙运柘祷蛄馨拖赴籽2。裀基因突变或缺失的小鼠造血祖细胞移植到鼠后,受体鼠亦发生白血病,并伴有白血病细胞髓外浸润。同时基因的表达水平对区分白血病干细胞和正常造血干细胞发挥了关键作用。国内外研究表明基因的异常可能参与了白血病的发病、多药耐药、血管新生及髓外浸润。基因抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡的作用在多种实体肿瘤细胞中已经得到证实,而在造血系统肿瘤如白血病中的作用及其机制尚不完全清楚。细胞系为人慢性粒细胞白血病急性红白血病变细胞系,具有较高的/钚裕钡捅泶颬蚣暗鞍祝N颐墙庠葱砸生型基因进行转染提供了条件。因此我们将腺病毒介导的基因转染人白血病原代细胞及细胞系,观察野生型对白血病细胞增殖、凋亡、侵袭、细胞周期进程、多药耐药及血管新生的影响,并中文摘要
病毒瓽啾龋珹甈瓽转染人原代白血病细胞后,细胞检测其可能的作用机制,为基因治疗白血病提供理论依据。研究分以下三部分:第一部分腺病毒介导的野生型基因对人慢性粒细胞白血病细胞系及原代白血病细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响目的探讨肿瘤抑制基因对人原代白血病细胞及细胞系增殖、凋亡及细胞周期的影响,并对其可能的作用机制进行初步探讨。方法将携带有野生型及绿色荧光蛋白的腺病毒—或空载体腺病毒瓽H救嗽籽2∠赴癒细胞系。觳庀赴で撸涣魇较赴羌觳庀俨《咀H鞠赴淖染效率、细胞凋亡率和细胞周期分布;光镜下检测细胞形态变化,,荧光染色检测、细胞集落形成等实验检测细胞增殖及凋亡。、、畑、Ы衜奖浠琖检测、、.平变化。钚约觳馐约梁屑觳釩.、蛋白活性。结果当时,转染第三天用流式细胞仪检测腺病毒转染细胞效率最高为.%。通过计数绿色荧光细胞数量检测转染原代细胞效率较低,选取了籽2∠赴骄H拘饰..%。当时在转染第霵及蛋白表达水平达到最高。转染后,......表达水平和未转染对照组的...。..愿腥靖词转染细胞后第煊肟赵靥逑增殖受抑,对转染的赴鲋骋种坡饰%。..愿腥靖词转染细胞后第欤赴畲笊长抑制率为.%,.%。..组细胞凋亡率为..ィ飨愿哂贏瓽组的.%和未转染组的士ィ鵓.。俨《咀H綤赴天后,、、、⒁、一
胞呈圆形或椭圆形,体积较大,染色质疏松;转染..椴糠细胞体积缩小,染色质高度浓缩边集,核碎裂核溶解。荧光染色显示正常细胞核派ǖ男翁试残危渡ǎ欢蛲鱿赴的核由于浓集而呈亮蓝色。转染...%.%鵓.。以俨《咀H綤赴天后,..镈琼脂糖凝胶电泳出现大小为至捌浔妒奶葑刺醮现呈一定间隔,这是诤诵√寮涑杀抖狭训慕峁珹瓽组及未转染组细胞未出现到庀窒蟆赴芷谙允疽訫—.H綤赴天,/.%,/.%,.τ贕疓谙赴壤渐增加,处于/谙赴壤鸾ゼ跎伲赴芷谧柚驮贕疓当时,细胞转染..谌霿检测癙—峁允荆蹵表达水平无明显变化,而瓵表达水平在未转染组、⒆H続甈狦组分别为.;士;.,转染后瓵表达水平明显减低。以H綤赴天后,.—橄赴活性..—..活性,。以H綤赴天后,..橄赴.....、.、.士和未转染组细胞内..、.、.表达水平,转染.—,而降低丁以转染细胞系旌螅醋H咀椤⒆H続瓽组、转染..榈蛲鱿喙鼗虻谋泶锼椒直鹞#:
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