CDK2干扰RNA对人肝癌细胞HepG2细胞细胞核与细胞浆蛋白质组的影响.pdf

内蒙古医学院
硕士学位论文
CDK2干扰RNA对人肝癌细胞HepG2细胞细胞核与细胞浆蛋白质组
的影响
姓名:王震宇
申请学位级别:硕士
专业:免疫学
指导教师:王文礼
20090501
中文摘要目的利用干扰际豕菇–扇臨真核表达载体并稳定转染人肝癌赴匆种艭谋泶铮鄄霤泶锸芤种坪蟮娜烁伟┫赴闔细胞生物学活性及运用双向电泳一图像分析一质谱技术研究亚细胞结构蛋白质组的改变,探讨在肝癌细胞增殖中的作用,为肝癌的发生、发展的研究及诊断与治疗提供有价值的资料。方法菇–扇臨真核表达载体氪!眦,电泳及测序鉴定。侍宸ㄗH綪綺“礁伟〩细胞株,筛选阳性转染细胞克隆,制备稳定转染氪痗腍细胞系。觳饣竦玫奈榷ㄗH鞠赴迪赴曲线、细胞周期的改变。ü齊狿比较转染前后凝胶电泳一质谱技术一数据库搜索,比较转染前后细胞浆与细胞核蛋白质组的变化。结果晒菇薈扇臨真核表达载体。经鉴定证实,构建的序列与基因库中序列完全相同,并且未发现有突变、缺失、插人等异常存在。竦梦榷ㄗH哪砌。斑牡腍细胞系,命名为删籋。胱H究罩柿W榈表达水平显著下降。ü双向电泳一图像分析一质谱技术得到个差异表达的蛋白。稳定转染细胞核与细胞浆未见表达的蛋白质各觯ê颂翘錝类似物,微管蛋白等蛋白质,细胞核与细胞浆三倍以上差异的蛋白质各觥=〩细胞系。瓹扇臨可明显降低赴鸆的表达,、细胞的增殖、分化及细胞凋亡的信号转导调节、正常细胞的恶性转化的表达。讯一赴臀醋H咀榈腍细胞相比,轓把禢籋组细胞的生长速度减慢,期细胞增多,/,稳定转染橄赴腃后,及发育调控以及肿瘤的发生、发展和耐药性形成。关键词干扰肝癌蛋白质组学
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鳓指导教师签名锄刍二论文作者签名』翘趵年翵内蒙古医学院学位论文原创性声明秒年伽协日学位论文版权使用授权书印年占月矽日郑重声明:本人所呈交的学位论文是在导师指导下,独立进行研究所取得的研究成果。除文中特别加以标注引用的内容外,本论文内容不包含其他个人或集体已经公开发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人学位论文与资料若有不实,愿意承担一切相关的法律责任。论文作者签名本人完全了解学院有关保留、使用学位论文的规定,同意学院保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版。学院享有发表、复制、查阅、借阅及申请专利等权利。可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。同时本人保证:毕业后发表、使用学位论文以及结合学位论文研究课题再撰写的文章,作者署名单位一律为内蒙古医学院。
干扰匀烁伟┫赴鸋细胞细胞核与细胞浆蛋白质组的影响细胞增殖是生命的基本特征,而细胞增殖是通过细胞周期来实现的。现已知细胞周期的调控是一种复杂的,多因子,多层次的调控,其中细胞周期蛋白和细胞周期蛋白依赖性激酶猟,在调控中发挥了重要的作用。是易逯械闹匾3稍保珻隒岷喜⒃谙赴芷诘腉砥谄鹱用¨。,它的过度表达能加速至谧;床斡胂赴芷贕疭限制点、贒复制和中心体复制的调节∞.俊9谕夤ǹN南妆ǖ涝诙嘀种琢鲋蠧疌是促进细胞增殖的主要因素,因此抑制的活性能够抑制肿瘤细胞的增殖。肝癌琀且恢址⒉÷矢摺⒅瘟评选⑺劳雎矢叩亩裥灾琢癌的死亡率在所有恶性肿瘤中居第二位,年死于肝癌的人数占全世界肝癌年死亡总数的%8伟┑姆⒉』浦两袢圆幻髁耍胰狈τ行У脑缙谡锒戏椒ê椭瘟瓢械恪蛋白质组学是一门以全面的蛋白质性质研究为基础,在蛋白质整体水平对疾病机理、细胞模式、功能联系等方面进行探索的科学。近年来也已有学者应用双向凝胶电泳和质谱技术分析肝癌细胞系及组织的蛋白表达谱哺。质组学技术高通量,高灵敏的特点,可较理想地显示多因素影响下的癌细胞蛋白质组的改变,为寻找直接参与癌转移复发的关键蛋白质分子拓展了思路¨。细胞的细胞核是细胞的控制中心,在细胞