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集美大学
硕士学位论文
水产品中多种喹诺酮类药物残留量检测方法的研究
姓名:魏博娟
申请学位级别:硕士
专业:农产品加工及贮藏工程
指导教师:吴成业
2011-06-12
水产品中多种喹诺酮类药物残留量检测
方法的研究
摘要
喹诺酮类(Quinolones)药物是一类人工合成的人畜共用抗生素类药物,对革兰氏阴
性菌和阳性菌、支原体、衣原体等有抗菌作用,常被用于水产养殖中的病害防治。随着人
们对食品安全问题的关注,渔药残留问题不仅成为各国相关部门关注的焦点,也是普通民
众关心的社会问题。近年来常用于水产品中药物残留的检测方法主要有:酶联免疫测定法、
毛细管电泳法、气相色谱法、高效液相色谱法和联用技术。其中,高效液相色谱法和液质
联用技术是目前应用较多的方法,但是大部分方法仅限于测定一种或少数几种喹诺酮类药
物。本论文旨在建立水产品中同时检测多种喹诺酮类药物的高效液相色谱法和高效液相色
谱-串联质谱法。主要进行以下 4 方面研究:
1)研究建立同时检测水产品中 6 种喹诺酮类药物残留量的高效液相色谱法。根据高
效液相色谱的特点,比较了不同的液相色谱柱对该类药物的分离效果,考察了对分析效
果有重要影响的流动相组成及配比、pH、流速、柱温、最适发射和激发波长等液相色谱
条件;对前处理过程中样品的提取、净化步骤进行了对比优化;通过对方法的检测限和
加标回收率的验证,考察方法的稳定性、准确度和适用范围。经反复实验探索,最终确
定了以酸化乙腈溶液提取样品中残留的恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、噁
喹酸和氟甲喹,正己烷脱脂,Varian Bond Elut C18 固相萃取小柱净化,经 Zorbax Elipse XDB-
C18(150 mm× mm,5 µm)柱分离,用高效液相色谱荧光检测法测定,外标法定量。
实验结果显示,标准品线性关系良好,测得各种药物加标回收率均在 %以上,环丙沙
星、恩诺沙星、诺氟沙星和氧氟沙星检测限为 5 µg/kg,噁喹酸和氟甲喹检测限为 10 µg/kg,
相对标准偏差均在 %以内。
2)建立了同时检测水产品中 19 种喹诺酮类药物残留量的高效液相色谱-串联质谱法。
试样中 19 中喹诺酮类药物用甲酸-乙腈溶液(1:99,V/V)提取,乙腈饱和正己烷净化,用含 2
mmol/L 乙酸铵的 %甲酸-乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,SRM 扫描方式进行测定,
外标法定量。1、5、20 µg/kg 3 种浓度水平下进行加标回收实验,每个水平重复测定 6 次,
平均回收率为 %~%,相对标准偏差 %~%。空白样品中添加 19 种 1 µg/kg
的喹诺酮类药物标准溶液,经测定其中 17 种药物重复测定平均回收率可达到 %以上,
氟罗沙星和吡哌酸在 2 µg/kg 浓度下重复测定平均回收率可达到 %以上,表明 17 种喹
诺酮类药物检测限可达到 1 µg/kg,氟罗沙星和吡哌酸检测限可达到 2 µg/kg。最后选取青
蟹、鲈鱼、虾、鳗鱼、草鱼、鲍鱼、甲鱼和牡蛎,在 5 µg/kg 加标浓度下进行验证测定,
I
回收率在 %~%,RSD 在 %以内。
3)探讨了上述两种检测方法的不确定度来源并对其进行了分析评定,对测量结果的
可靠性有了一个直观的描述,对结果的质量进行了更加完整的定量描述。通过对测量结果
的不确定度分析找到实验过程中容易对结果造成较大影响的因素,从而采取相应措施减小
或避免这些影响。经分析评定,发现对测量结果影响较大的不确定度分量主要来源于标准
品的配制过程和加标回收的影响,这两个环节的检测过程中需引起重视。
4)建立的水产品中 6 种喹诺酮类药物检测的高效液相色谱法已制定成行业标准,并
已报送农业部标准管理部门等待审定,高效液相色谱-串联质谱法也将制定成地方标准。
本课题建立的针对水产品中多种喹诺酮类药物残留量的两种检测方法,样品前处理方
法简便、准确,可同时快速检测多种该类药物残留量,既节约了成本,又节省了时间。通
过大量实验验证,对于日常药物残留量检测工作具有实际的参考和应用价值。
关键词:喹诺酮类药物残留,水产品,高效液相色谱,液-质联用,测量不确定度
II
The Study of Detection Methods of Mult-quinolones
Residual in Aquatic Products
Abstract
Quinolones were synthetic antibiotics for peo