BCA测蛋白的具体操作步骤.docx

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. 原理 BCA 蛋白浓度测定试剂盒 (BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用蛋白浓度检测方法之一 BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和
高兼容性。检测浓度下限达到 25 微克 / 毫升，最小检测蛋白量达到 微克， 待测样品体积为 1～ 20 微升。
二 . 试剂盒组份 组 份 Cat: KGPBCA （ 250 assay 酶标板 /50assay 1mL 比色杯） 蛋白标准溶液（ 0. 5 μg/ μ）L 5 mL BCA 试剂 A 25 mL×2 BCA试剂 B 1mL
三 . 操作步骤
A． 酶标板操作
1. 标准曲线的绘制： 取一块酶标板， 按照下表加入试剂
孔号
0 1 2 3 4 5 6 7 蛋白标准溶
液（ μL） 0 1 2 4 8 12 16 20
去离子水（ μL） 20 19 18 16 12 8 4 0
对应蛋白含量（ μg） 0

孔号
0
1
2
3
4
5
6
7
蛋白质
0
1
2
4
8
12
16
20
溶液
（μL）
去离子
20
19
18
16
12
8
4
0
水（ μL）
相应蛋
0

1
2
4
6
8
10
白质含
量（ μg）
2. 根据样品数量，按 50 体积 BCA 试剂 A 加 1 体积 BCA 试剂 B（ 50:1）配制适量 BCA工作液，充分混匀；
各孔加入 200 μ L BCA工作液；
把酶标板放在振荡器上振荡 30sec，37℃放置 30 分钟，然后在 562nm 下比色测定。以蛋白含量（ μg）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线；
5. 稀释待测样品至合适浓度，使样品稀释液总体积为 20μL，加入 BCA 工作液 200 μL，充
分混匀， 37℃放置 30 分钟后，以标准曲线 0 号管做参比，在 562nm 波长下比色，记录吸光值；
6. 根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量（ μg），除以样品稀释
液总体积（ 20μL），乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度（单 位： μg/ μL）。
B． 分光光度计测定
1. 标准曲线的绘制： 各管按照下表加入试剂 孔号 0 1 2 3 4 5 6 7 蛋白标准溶液 （ μL） 0
5 10 20 40 60 80 100 去离子水（ μL） 100 95 90 80 60 40 20 0 对应蛋白含量（ μg） 0
1
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