黄连素调节醛糖还原酶p38MAPK信号通路抗糖尿病肾病研究.pdf

中山大学
硕士学位论文
黄连素调节醛糖还原酶/p38MAPK信号通路抗糖尿病肾病的研究
姓名:刘慰华
申请学位级别:硕士
专业:中西医结合基础
指导教师:黄河清
20070501
黄连素调节醛糖还原酶/藕磐抗糖尿病肾病的研究专业:中西医结合基础硕士研究生:刘慰华师:黄河清教授摘要导糖尿病肾病翘悄虿性微血管并发症之一,是导致终末期肾衰竭的主要原因,严重影响了患者的生活质量和危害患者的生命健康。的发病机制非常复杂,尚未完全清楚,目前认为是多种复杂的因素,如糖代谢异常、肾脏血流动力学、蛋白质酶糖基化、氧化应激、多元醇通路激活、遗传易感基因等综合作用的结果。近年来,醛糖还原酶在糖尿病慢性并发症包括的发生所起的作用日益受到关注。醛糖还原酶是多元醇通路中重要的限速酶,持续高血糖刺激下,醛糖还原酶被激活,通过活化多元醇通路,启动了一系列过程如高渗应激,葡萄糖及脂质的氧化应激,蛋白的非酶糖基化等单独或协同作用损伤肾脏微血管内皮细胞、肾小球和肾小管细胞,引起细胞外基质增加,系膜扩张,肾脏肥大,从而导致糖尿病肾病的发生。歉咛侵绿悄虿∩霾》⒉〉闹匾5男藕糯ǖ莘肿樱琾信号通路是细胞信号传递的交汇点或共同通路。目前研究认为,细胞内高糖刺激下,多元醇通路激活后可以通过二酯酰甘油通路、氧化应激、蛋白质非酶糖基化等环节最终导致返募せ睿姿峄B家蜃樱鹘与细胞生长、增殖、分化和细胞外基质蛋白相关基因的表达,促进或加重糖尿病慢性并发症的病变过程。黄连素,【殖菩￠藜是从小檗属植物黄连ブ刑崛〕龅囊恢忠爨嗌碱。既往大量研究证实:黄连素具有降血糖、降血脂、降血压,抑制醛糖还原酶、抗氧化等药理活性,这些研究显示了黄连素作为防治糖尿病并发症用药具有一定黄连素调市醛糖还原酶/藕磐房固悄虿∩霾〉难芯,珻、黄柏中山大学硕十学位论文
第一章黄连素对糖尿病肾损伤大鼠肾功能保护作用及醛糖还原酶的影响迥谑笛的临床价值和应用前景。近年来有研究发现:黄连素可以明显改善吞聊虿〈鼠的肾脏损害,保护肾功能,延缓糖尿病肾脏病变的发生和发展。目前,尚未见到从影响醛糖还原酶/信号通路研究黄连素抗糖尿病肾病的作用机制的研究报道。因此,在前人研究基础上,本课题通过体内、体外实验观察黄连素对糖尿病肾损伤大鼠肾功能的保护作用,对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞细胞增殖与胶原合成的影响,从醛糖还原酶/方面探讨黄连素抗糖尿病肾病可能的作用机制。研究目的⒐鄄旎屏囟粤措遄艟诱导的糖尿病肾损伤大鼠肾功能的保护脏醛糖还原酶活性及其和蛋白表达的影响研究方法⒛P透粗啤⒎肿椤⒏籛笫螅逯匚士小冰盒中新鲜配制粗铺悄虿〈笫竽P汀W⑸后测血糖,以禁食血糖≥.疞者,为糖尿病模型大鼠。选取糖尿病模型大鼠只,随机分为模型组、黄连素组,每组各只。选同批次只正常大鼠做为正常对照组。糖尿墒模型复制成功后次日,黄连素组大鼠给予%醋酸纤维素钠溶液制成的黄连索混悬液,灌胃,。每同给药时间恐芨天,共观察周。实验期间大鼠自信号转导通路作用⒐鄄旎屏囟粤措遄艟诱导的糖尿病肾损伤大鼠氧化应激、肾时后,单次腹腔注射/链脲佐菌素,以枸椽酸钠溶液稀释,,由进食、饮水,不使用胰岛素等降糖药物。中山大学硕十学位论文黄连素调节醉糖还原酶/藕磐房固悄虿∩霾〉难芯
明显改善肾脏肥大指数,显著降低血糖、⑸龉δ芟喙刂副昙觳猓貉L怯闷咸烟茄趸阜ḿ毂;血尿素氮血肌酐直鹩妹阜ā⑺俾史ㄓ葿全自动生化分析仪进行检测;虻鞍测定用磺基水杨酸—硫酸钠比浊法;常规方法制备石蜡切片,作染色,应用咔逦炔噬ú±∏蚱均面积、平均体积⒖寡趸副昙觳猓喊凑帐约梁兴得鳎绵堰恃趸阜ḿ觳庋G宄趸锲化酶钚裕河昧虼捅韧姿岱检测血清脂质过氧化物代谢产物⑸鲎橹┨腔乖钚浴偷鞍妆泶锏募觳夥直鹩τ米贤分光光度法、、方法。研究结果⒒屏囟許诱导的糖尿病肾损伤大鼠肾功能相关指标的影响实验周时,糖尿病模型组与正常对照组相比,体重明显下降,肾重/体重蚀笾甘、血糖、∏蛎婊肾小球体积明显增大,提示糖尿病大鼠肾脏肥大、肾小球受损、肾功能障碍形成,糖尿病肾损伤动物模型建立成功。模型组相比较,黄连素能有效控制体重下降,。⒒屏囟許诱导的糖尿病肾损伤大鼠血清盍蚆含量的影响与正常组相比,模型组大鼠血清超氧化物歧化酶幕钚悦飨韵陆,而脂质过氧化物代谢产物丙二醛肯灾黾—,提示了糖尿病早期肾功能受损时伴有机体氧化应激的增强。黄连素组与模型组相比较,血清钚悦飨栽黾,。⒒屏囟許诱导的糖尿病肾损伤大鼠肾脏醛塘还原酶活性及其黄连素调节酵糖还原酶/藕磐房固悄虿∩霾〉难芯一丙二醛俊和蛋白表达的影响中山大学硕士学位论文Ⅱ
第二章黄连素对高糖培养的大鼠肾小球