单增李斯特氏菌检测详解.pptx

李斯特氏菌
特征
格氏李斯特氏菌
英诺克李斯特氏菌
绵羊李斯特氏菌
单核细胞增生李斯特氏菌
默氏李斯特氏菌
西尔李斯特氏菌
威尔斯李斯特氏菌
β -溶血
－
－
＋
＋
－
＋
－
CAMP (Staphylococcus aureus)
－
－
－
＋
－
＋
－
CAMP (Rhodococcus equi)
－
－
＋
－
－
－
－
甘露醇
＋
－
－
－
＋
－
－
α甲基-D－甘露糖苷
ND
＋
－
＋
ND
－
＋
L-鼠李糖
－
d
－
＋
d
－
d
可溶性淀粉
＋
－
－
－
＋
ND
ND
D-木糖
－
－
＋
－
－
＋
＋
马尿酸盐水解
－
＋
＋
＋
－
ND
ND
硝酸盐还原
－
－
－
－
＋
ND
ND
小鼠致病力
－
－
＋
＋
－
－
－
样品的存放与制备
冷冻样品：应于2℃～5℃解冻，且不超过18小时；若不能及时检验，应置于－15℃保存。
非冷冻的易腐样品：尽可能及时检验，若不能及时检验，应置于4℃冰箱保存，在24h之内检验。
无菌取样品25g(mL)放入灭菌均质杯或均质袋中加225mL FB1增菌液中，充分均质。
增菌培养
225mL FB1 30℃±1℃培养25h±1h，吸取1mL，加入10mL FB2增菌液中30℃±1℃二次增菌25h±1h。
VIDAS快速筛选（可选）
FB2增菌液进行VIDAS快速筛选。
筛选为阴性的结果可直接报告未检出。
筛选为阳性的结果继续分离培养和鉴定。
分离培养
取增菌液一环，划线分离于选择性培养基OXA、PALCAM上，35℃±1℃培养24h～48h。
菌落形态：24h后菌落呈现黑色，直径为1mm，在其周围形成一个黑色环。培养48h，菌落仍成黑色，直径2mm～3mm，除在菌落周围有一环外，在菌落中心部位的深层也形成黑点。
挑取5个或更多的可疑菌落，接种于TSA-YE。
鉴定
蓝色菌落检验
用45°斜射光照射TSA-YE平板，菌落呈现蓝灰色到蓝色。 （设标准菌株对照）
鉴定
典型运动镜检
李斯特氏菌为短棒状杆菌，可见轻微的旋转翻滚。 （设标准菌株对照）
注：压片法或悬滴法
暗光
鉴定
革兰氏染色
短杆状革兰氏阳性反应
注：陈旧培养物多转为阴性。
鉴定
过氧化氢酶试验
挑取TSA-YE平板上的菌落于洁净载玻片上，滴加1滴3％的过氧化氢溶液，李斯特氏菌呈过氧化氢酶阳性反应。
鉴定
溶血试验
刺种7％羊血琼脂平板，并刺种阳性对照菌（单核细胞增生李斯特氏菌和绵羊李斯特氏菌）和阴性对照菌（英诺克李斯特氏菌），30℃培养24h～48h。
单核细胞增生李斯特氏菌 窄小的β溶血环
西尔李斯特氏菌 窄小的β溶血环
绵羊李斯特氏菌 大的β溶血环
其他 不溶血