少突胶质前体细胞移植治疗大鼠脊髓损伤实验研究.pdf

少突胶质前体细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的实验研究摘要背景与目的脊髓损伤是一种常见的中枢神经系统损伤,可造成患者的感觉、运动等功能严重障碍,给自身、家庭和国家带来沉重的经济、社会负担。虽然大量基础实验研究对动物脊髓损伤的治疗取得了令人鼓舞的结果,但是俅仓瘟萍顾杷鹕说男Ч贾詹涣钊满意。因此,积极开展脊髓损伤的治疗研究有着重要的科学和社会意义。随着研究的深入人们认识到轴突脱髓鞘改变是临床和实验脊髓损伤的重要病理变化。外力作用脊髓后通常在软脊膜下存留部分相对正常的白质区域,多种继发性损伤因素的影响进一步造成了残留神经纤维的脱髓鞘改变。研究表明脊髓损伤后轴突脱髓鞘改变与损伤局部少突胶质细胞死亡有着密切的联系。脊髓损伤不仅造成神经元的丢失,同时还导致少突胶质细胞大量的死亡进而引起神经轴突脱髓鞘改变。正常的髓鞘及髓鞘形成细胞对于神经轴突的功能发挥有着重要作用,因而脊髓损伤后少突胶质细胞死亡和轴突脱髓鞘改变进一步影响了残留神经纤维功能的正常发挥。上述研究分析表明,脊髓损存留神经纤维的功能发挥。因此,我们推测改善脊髓损伤后轴突髓鞘化可有助于损伤脊髓神经功能的恢复。由于少突胶质细胞死亡是造成损伤脊髓轴突脱髓鞘改变的主要原因,因而补充丢失的少突胶质细胞、改善残留神经轴突髓鞘化,有利于脱髓鞘神经轴突的功能恢复、最大限度地发挥残留神经纤维的作用,从而促进损伤脊髓神经功能的恢复。少突胶质前体细胞琌是未成熟的少突胶质细胞,能够在体内增殖、迁移、最后分化为成熟少突胶质细胞并形成髓鞘发挥功能。作为移植细胞比成熟少突胶质细胞更具有优势,也不像干细胞那样容易受到移植微环境的不利影响。基于以上分析,本实验拟通过移植治疗改善损伤脊髓轴突髓鞘化,发挥残留神经纤维的功能,进而实现促进脊髓神经功能恢复的目的。通过本课题研究进一步加深对脊髓损伤轴突脱髓鞘改变生物学意义的认识,并为今后脊髓损伤治疗研究提供~种新的思路。后由于继发性损害和少突胶质细胞死亡而造成残留脊髓组织内轴突脱髓鞘改变,影响了第三军医大学博士学位论文
⌒律∈盨笫蟠竽云げ阆赴蠴嘌ü相差显微镜和扫描电子显微镜连续观察体外条件下的生长情况。胞化学技术检测研究分析体外条件下的定向分化规律和分化成熟情况,并采用ü鼴运动功能评分法连续评估脊髓损伤后大鼠后肢运动功能的恢复情况,并采用神经电生理技术检测分析移植治疗对大鼠损伤脊髓神经传导功能恢复的甇浦仓瘟剖鹾周时实验观察比较了各组大鼠损伤脊髓组织的大体病理嘌蠴罅吭鲋成こ实湫偷那疤逑赴翁迪录浒宄式形,为折光性强的小亮点,胞体具有双极细胞突起。扫描电子显微镜观察见紧融合成片的星形胶质细胞。通过振荡分离和差速贴壁等方法分离获得了大量的,甇芄辉谔逋饣跫嘌诩绦し只宀欢显龃螅赴黄逐渐增多、增长并形成大量分支。在体外培养天时逐渐定向分化为成熟的方法笛椴捎谜竦捶掷牒筒钏偬诘确椒ń徊椒掷隣ü庖呦赴Ъ术对分离后的进行分析鉴定。甇谔逋饣跫嘌屑绦ぃü嗖钕晕⒕盗鄄旌兔庖呦觳夥ㄑ芯糠治鯫谔逋馓跫碌姆至言鲋衬芰Α捎肁’蚧鞣ㄖ谱鞔笫蠹顾璐炝阉鹕四P停笛榇笫蠓治K淖椋移植治疗组、移植对照组、单纯损伤组及假手术组。在脊髓损伤术后第焓苯逋标记的移植治疗大鼠脊髓损伤。影响。变化情况,研究分析了移植治疗对大鼠损伤脊髓局部组织内白质存留的影响;实验采用免疫组织化学及免疫荧光技术检测分析了移植后在体内的存活、分布及分化成熟等情况;通过免疫组织化学、髓鞘染色、及透射电镜技术等方法研究分析了移植治疗对大鼠损伤脊髓组织内髓鞘含量、髓鞘相关基因表达及轴突髓鞘化超微结构的影响;实验还观察研究了移植治疗对大鼠损伤脊髓内神经元、神经轴突和胶质反应的影响。结果密贴附在星形胶质细胞表面生长,胞体较小呈近似圆形,直径约,胞体周围具有纤细的两极或三极细胞突起。嘌一天时形成明显的细胞分层,上层为成簇生长的,下层为免疫细胞化学检测结果显示分离后特异性表达甉的比例达%。第三军医大学博士学位论文
少突胶质细胞,镜下见其胞体呈圆形,胞体周围具有大量网状纤细突起,呈“分枝状或“蜘蛛网’’状分布于胞体四周。,在观察后期的数量逐渐增加,于第焓毕赴看锏阶疃唷甇浦仓瘟谱榇笫蠛笾硕δ艿幕指辞榭雒飨院糜谝浦捕哉兆楹偷ゴ克评分情况比移植对照组结果更好;第和天时移植治疗组大鼠的后肢运动功能婪纸峁飨院糜谝浦捕哉兆棰。窬缟砑觳饨峁砻鱋浦仓瘟谱榇笫笏鹕思顾枭窬ǖ脊δ艿幕指亦明显好于移植对照组和单纯损伤组。