大黄素逆转卵巢癌细胞耐药及抑制侵袭作用机制实验研究.pdf

山东大学
博士学位论文
大黄素逆转卵巢癌细胞耐药及抑制侵袭作用机制的实验研究
姓名:李娟
申请学位级别:博士
专业:妇产科学
指导教师:刘培淑
20090522
大黄素对卵巢癌细胞系的逆转耐药及抑制侵袭作用机制的实验研究中文摘要研究背景:大黄素属葸醌类衍生物,是大黄、虎杖、首乌等多种中药的有效成步深入,其抗肿瘤作用越来越受到人们的重视。,歉究浦械某<裥灾琢觯渌劳雎示痈究肿瘤首位。手术治疗和以紫杉醇、顺铂等为主的联合化疗方案是目前卵巢癌治疗物产生耐药性,约%以上的卵巢癌患者在治疗后会出现肿瘤病灶的侵袭和转移,瘤细胞在有丝分裂阶段疢期阻滞潭ǎ柚怪琢鱿赴姆至押头敝常盏枷胞凋亡。但在经过数个疗程化疗后,肿瘤细胞往往会出现对紫杉醇的获得性耐药,致使后续化疗失败。紫杉醇耐药的机制包括猤,猤表达的酶活性,能将化疗药物从细胞内泵出,降低细胞内的有效药物浓度从而导致多药耐药,其过表达是紫杉醇耐药的重要原因之一。凋亡抑制蛋白家族,械膕染色体连锁凋亡抑制蛋白博士研究生李娟博士生导师刘培淑专业妇产科学分之一,除了具有调节机体免疫,抗菌抗炎等作用外,近年来研究表明,大黄素还具有诱导肿瘤细胞凋亡及抑制肿瘤细胞转移等多种生物学效应。随着研究的逐卵巢癌的重要手段。而在临床治疗过程中会出现由于长期治疗而导致肿瘤细胞对化疗药从而导致肿瘤复发,五年存活率仅%。如何逆转卵巢癌细胞的耐药及抑制卵巢癌侵袭转移等问题成为卵巢癌治疗的热点和难点。紫杉醇是卵巢癌化疗的一线药物,作用机理是诱导和促进微管的装配,使微管在有丝分裂时不能形成纺锤体和纺锤体丝,导致快速分裂的肿升高,微管亚基的改变,凋亡途径改变等。是多药耐药基因一一琈一编码的一种跨膜转运蛋白,具有琗在凋亡过程中能够发挥重要的抑制细山东大学博士学位论文
第一部分:大黄素对卵巢癌细胞系诱导凋亡和逆转耐药作用及其机制的研究催化功能以及内分泌功能等多重生物学活性。它还可以刺激细胞增殖、分化和迁酶鹘诘腗募せ詈土姿峄创俳琢鱿赴脑鲋常煌ü系髦琢錾綪一和删的表达,增加对肿瘤细胞外基质以及基底膜的溶解;使肿瘤细胞中、㏄是一族锌肽酶超家族,参与肿瘤细胞对基底膜增高,与肿瘤转移密切相关。删成员中,基质金属蛋白酶一,一綪一因为能够特异性的降解细胞外基质和基底膜的主要成分型胶原,从而在肿瘤侵袭转移过程中发挥最直接和最重要的第一部分:大黄素对卵巢癌细胞系诱导凋亡和逆转耐药作用及机制的研究;第二部分:大黄素对卵巢癌耐药细胞系侵袭能力的抑制作用及其机制研究。芯看蠡扑饔糜谌寺殉舶┫赴礎和痶细胞的芯看蠡扑囟月殉舶┫赴牡蛲鲇盏甲饔茫还鄄齑蠡扑囟宰仙即加盏寄胞凋亡的作用,其过表达是导致紫杉醇耐药的机制之一。巨噬细胞移动抑制因子,是一种重要的免疫及神经内分泌因子,具有信号调节、免疫活性、促进炎症反应、移,抑制肿瘤细胞的凋亡,促进肿瘤血管生成,在多种肿瘤的发生、发展和转移中担任重要角色。鞍自诼殉舶⑹彻馨⒏蜗赴┑榷嘀种琢鲋械谋泶锵著升高,表明斡肓酥琢龅姆⑸⒄构獭能通过调控细胞外信号调节激的表达升高,促进肿瘤细胞转移过程中微血管的形成,这些可能是俳肿瘤细胞侵袭和远处转移的重要因素。基质金属蛋白酶拖赴饣,的降解,是目前已知的能够降解胶原纤维的唯一酶类。在多种转移癌中表达明显作用。本研究分为两部分:目的:生长抑制作用;药细胞系痶凋亡的变化;山东大学博士学位论文,
觳獯蠡扑刈饔们昂舐殉舶┫赴心鸵┘暗蛲鱿喙鼗蚣暗鞍椎谋泶锼平,探讨大黄素的作用机制。方法:ḿ觳獠煌ǘ却蠡扑,,,对虯/的生长抑制作用;ḿ觳獾团ǘ却蠡扑亓:献仙即甲饔檬保宰仙即家种颇药卵巢癌细胞痶生长的增强作用;流式细胞仪觳獯蠡扑氐ザ或联合紫杉醇作用于耐药卵巢癌细胞痶的凋亡诱导情况;狿检测大黄素作用后痶细胞内蛃騧泶铮坏鞍子迹法觳釧和痶细胞中蛃白的表达,并检测大黄素作用后痶细胞中、和蛋白表达;罗丹明外排实验检测猤δ芩降母谋洹结果:⒋蠡扑囟訟和痶细胞的生长抑制作用应用ḿ觳獠煌ǘ却蠡扑刈饔糜诼殉舶┫赴礎和痶时后的生长抑制作用,结果显示:赴髯橄赴鲋陈史直鹞#嚎瞻对照组.%±ィ捍蠡扑.%;大黄素.%ィ淮蠡扑ァ.%;大黄素ァァ/赴髯橄赴鲋陈史直鹞#嚎瞻锥哉兆.%;大黄素ァ.%:.%。⒋蠡扑囟訟和痶细胞的凋亡诱导作用应用ḿ觳獠煌ǘ却蠡扑刈饔糜诼殉舶┫赴礎/时后的凋亡诱导作用,结果显示各组细胞凋亡率分别为:空白对照组ィ蠡扑刈.%:蠡扑刈ィ蠡素组.%。⒋蠡扑赜胱仙即级訟和痶细胞的联合作用应用ḿ觳獯蠡扑和紫杉醇单独或联合作用于卵巢癌细胞系虯/时后的生长抑制作用,结果显示,赴各组细胞增殖率分别为:空白对照组ァ.%;大黄素山东大学博士学位论文甃
胞中,凋亡抑制蛋白家族的和的表达也比在其亲本细胞斜大黄素结论:的细胞凋亡。±ィ鹤仙即ァ.%;大黄素仙即甲ァ.%。细胞各组细胞增殖率分别为:空白对照组.%±ィ淮蠡扑