雌二醇对脑缺血再灌注损伤脑保护作用机制研究.pdf

华中科技大学同济医学院博卜研究生毕业论文
雌二醇对脑缺血再灌注损伤脑保护作用机制的研究
博士研究生卢宏
导师方思羽教授
华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科,武汉
中文摘要
流行病学显示,绝经期后的妇女比年轻妇女更易患神经变性疾病如
和帕金森氏病、缺血性脑损伤,如中风、记忆和认知功能障碍。体内外一些研究显
示雌激素无论年轻和年老均可保护大脑免于损伤。近年对雌激素脑保护机制的深入
研究,越来越多的证据表明雌激素对缺血性卒中具有神经保护作用。热休克蛋白是
一组高保守的蛋白质,在环境的应激下被诱导出。体内外研究证明具有保护
神经元的作用,雌激素能否使这一具有神经保护作用的应激蛋白表达上调,目前在
局灶性脑缺血再灌注损伤动物模型中未见报导。神经营养因子主要包括
等,是一类对神经细胞的发生、发育、分、再生、衰老、死亡和疾病等有
着直接或间接作用的蛋白质。体内外研究及对脑缺血具有保护作用。
但由于外源性不能透过血脑屏障,如何应用于动物实验和临
床只有将它们行鞘内注射,但存在单次注射作用时间短,需反复多次注射,且易引
起继发性损伤的问题。近年来,一方面人们把目光转向基因治疗,构建含有神经营
养因子的各种病毒载体对缺血性脑卒中进行实验性基因治疗,目的使缺血性卒中的
实验动物脑内神经营养因子表达增高,以实现神经营养因子脑保护减轻脑损伤的目
的,但基因治疗作为探索可能的给药途径仍存在诸多问题。另一方面,开发一些药
物,能通过这些药物干预治疗促使内源性及其受体的表达,
也将成为药理学干预的新策略。雌激素能否使局灶性脑缺血再灌注损伤后内源性神
经营养因子表达上调,从而起到治疗作用,目前国内外未见有报道。脑缺血中存在
着细胞的凋亡尤其是在半暗带。是重要的抗凋亡蛋白,是凋亡级联反
应中重要的效应蛋白,雌激素能否在凋一亡级联反应中发挥作用值得进一步研究。,
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因此婀究通过建立局灶性脑缺血再灌注实验动物模型,研究雌二醇对局灶性
脑缺血再灌注损伤后及的影响,以
探讨雌二醇对脑保护的分子机制,为雌二醇治疗脑梗死提供理论上依据,探索能使
有益基因表达上调的新的治疗药物。
第一部分雌二醇对脑缺血再灌注损伤”表达的影响
目的观察雌二醇对脑缺血再灌注损伤表达的影响,研究雌二醇脑保护的分
子机制,为雌二醇治疗缺血性卒中提供理论依据。
方法将只雄性大鼠随机分为假手术组,局灶性脑缺血再灌注
组,组及雌二醇治疗脑缺血再灌注
组每组动物只,假手术组只口将雌二醇溶于精制植物油内于脑缺血前天每天
腹腔注射治疗,假手术组和脑缺血再灌注组同等条件下给予相同体积的植物油腹腔
注射。采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,采用连续切片免疫组化
技术检测脑组织中
结果血管内皮在假手术组,脑缺血再灌注,雌二醇治疗组均表达。假手术组皮
层和纹状体无表达。雌二醇治疗组与脑缺血再灌注组比较,在再灌注
表达无变化,雌二醇治疗组表达,在脑缺血再灌注后皮层明显高于
脑缺血再灌注组。在雌二醇治疗组较脑缺血再灌注组表达仍有差别。
结论结果提示是缺血后神经元损伤的一个敏感指标,它在局灶性脑缺血
再灌注损伤中发挥重要作用,给予雌二醇预先干预,可以增加脑缺血再灌注脑组织
内神经元的表达,为雌二醇治疗缺血性卒中提供了理论依据,为缺血性卒中
提出了新的干预治疗策略。
第二部分雌二醇对脑缺血再灌注损伤表达的影响
目的观察雌二醇对脑缺血再灌注损伤表达的影响,研究雌
二醇与上述神经营养因子的关系,探索雌二醇脑保护分子机制的新观点。
方法将只大鼠随机分为假手术组、局灶性脑缺血再灌注
组及雌三醇治疗缺血再灌注组,每时间
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点只,假手术组只,其中取每时间点中只及假手术组只行。将雌二
醇溶于精制植物油内于脑缺血前天每天腹腔注射治疗,假手术组和脑缺血再灌注
组同等条件下给予相同体积的植物油腹腔注射,采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血
再灌注损伤模型,采用和连续切片免疫组化法检测各组脑中上述神经营养
因子和蛋白的表达。
户
结果显示雌二醇治疗组与脑缺血再灌注组及假手术组比较使
在脑缺血再灌注后表达增加,使在脑缺血再灌注
表达均增加,高峰在,使在表达增加。
免疫组化显示雌二醇治疗组神经纤维阳性与脑缺血再灌注组、假
手术组比明显阳性,治疗组与脑缺血再灌注组及假手术组比较,
免疫阳性细胞数在表达开始增加,明显增高恢复至假手术水
平。雌二醇治疗组与脑缺血再灌注及假手术组比较皮质阳性细胞数在最明
显,仍高。
结论研究结果表明雌二醇可以使成年鼠脑缺血再灌注后脑内内源性
及表达增加,提示雌二醇通过上调内源性神经