VEGF反义RNA对骨髓瘤细胞U266生长及血管生成作用研究.pdf

口☆.英髖硕士研究福建医科大学生毕业论文驿¨蛐如画铩癇丹赛号一盯,反义怨撬枇鱿赴鸘は醚9苌勺饔醚卸所在院一福建医科大学协和临床学院福建省血液瘸研究所学科ㄒ诳蒲血被病研究生拼啦导师椿副教授刘窿艘剐教授研究起止时期年月至年二∞六年四月半性代码
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Ⅱ血管内皮细胞生长因子血管内皮细胞生长因子受体微升微克:“Ⅱ
;Ⅶ反义中文摘要方法:构建携带反义基因的真核表达载体甐;采用脂质体结论:反义梢砸种乒撬枇鱿赴鲋常俳涞蛲觯⒕哂锌关键词::反义还撬枇觯旱蛲觯谎9苌目的:探讨以为靶点,利用反义际踔瘟芃目尚行浴的条件培养基对内皮细胞增殖、迁移的影响。结果:成功构建携带反义基因的真核表达载体.;分别获得法转染重组质粒及空质粒到骨髓癯细胞。、赴蠽谋泶铮徊捎盟倪蚶快速比色法法鄄霼瓵甐细胞在无血清培养基中的增殖变化;采用流式细胞术检测.、.赴谖扪G迮嘌械牡蛲霰浠采用ā小室迁移实验观察由.、.、促进无血渍时细胞的凋亡;此外,该反义挂种内皮细胞的增殖、迁移。血管生成作用。因此,反义瘟瓶赡艹晌狹瘟频囊桓鲂碌闹瘟策略。
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Ⅶ及在骨髓瘤细胞上共表达,使得前言疫球蛋白蛋白亩裥匝R褐琢觥颊级裥匝R褐琢龅ィ过旁分泌作用刺激内皮细胞和骨髓基质细胞分泌细胞因子一斡牍撬枇鱿赴以骨髓瘤细胞为体外模型进行了以下研究:菇ㄐ匆錠虻恼婧吮泶镌靥錋;是来源赴郝さ慕赴寺⌒砸斐T錾樘匾斓牡タ寺∶发于中老年,患者中位生存期仅为年,近年来随着社会的老龄化,的发病率有明显增高的趋势。目前,的治疗主要是应用多种药物联合化疗,以及大剂量放、化疗联合自体或异基因干细胞移植,患者的生存率有所提高,但预后仍无明显的改善。为了减少治疗出现并发症的风险及改善预后,需寻找新的治疗药物、治疗手段。近年来研究发现患者的骨髓中微血管密度飨栽黾樱⒂牍髓瘤细胞的增殖活性即浆细胞标记指数收喙兀牖颊叩纳娉矢相关。相应地,患者血清中的升高与骨髓血管生成和存在相关。幢’因此,是的一个重要预后因子。除了作为生理性和病理性血管生成的重要调节因子,可以通过自分泌作用参与了骨髓瘤细胞的生长、生存、增殖和迁移。还通的生存、增殖;:增加破骨细胞的骨重吸收活性和趋化性。参与骨病和高钙血症的形成。通过促进血管生成、影响骨髓瘤细胞的细胞生物学行为、促进骨髓瘤细胞的免疫逃逸等途径对的病理形成和临床特征的产生起着重要作用。因此,针对及其信号传导途径的治疗已经成为临床治疗的一个重要的途径。为了降低基因的表达,扩大以为靶点的抗效果,我们拟侍宸ㄗH竟撬枇鱿赴鸘ü鼼秆。⒕攵縍和方法鉴定,;鄄霽匆錜对骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响;
鄄旃撬枇鱿赴鸘瓵蚒嘌锨宥匝9苣谄は赴鸈的增殖、迁移的影响。
材料与试剂细胞由福建省老年病学研究所游捷博士惠赠。大连宝生物公司赴辍⒅柿<熬细胞由上海医科大学附属长征医院侯健教授惠赠。.真核表达载体、。×刻崛∈约梁上海中科开瑞生物公司胶回收试剂盒质粒罅看炕约梁德国公司限制性内切限制性内切用酆厦华美生物工程公司美国
约梁孔、孔、紫赴嘌凝胶成像及分析系统:倒置光学显微镜和倒置荧光显微镜及成像系统:微量加样器二甲基亚砜兔抗人多克隆抗体琼脂糖辣根标记山羊抗兔∈瞧鳎台式低温离心机:紫外分光光度仪:酶标仪:┰鲆牵转移电泳仪:流式细胞仪:细胞培养箱垂直电泳槽转膜装置超净工作台北京市化工厂美电泳槽綣綝型公司公司型甊公司北京六一仪器厂北京东方仪器厂公司
第一部份含反义片段的重组靥宓墓菇实验方法于实验。实验前经台盼蓝拒染法检测细胞活力。氯仿剧烈震摇螅椅戮仓涸诘臀赂咚倮胄幕℃离去离子水配制的%醇洗涤沉淀物,离心,弃上清;赴嘌细胞培养于含%腞嘌褐校,,饱和湿度条件下的嘌渲信嘌C—齑ù淮危《允て谙赴孀B糚,吹打,置室