卵母细胞体外成熟培养研究.pdf

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中文摘要芯勘尘埃航昀矗ㄖ际跤辛送环擅徒姆⒄梗逋馐。外成熟的卵母细胞存在着细胞浆成熟欠缺或核浆成熟不协调的问题,这是制利于印母细胞成熟的微环境。在成熟培养体系中引入颗粒细胞的生长液能否题。在助孕技术中普遍应用的卵巢促排卵方案,虽然可以使获卵率提高,但促性腺激素的周期,将不成熟的卵母细胞在体外培养成熟,进行体外受精和胚胎移植,它克服了促排卵药物的副作用,是今后助孕技术发展的趋势之卵母细胞的成熟包括细胞核成熟和细胞浆成熟两部分,其中第一极体的释放提示细胞核成熟的完成,而对细胞浆成熟的评价是在俸外受精后通过受精和卵裂情况完成的。虽然未成熟卵经体外培养后细胞核成熟的比例在%、%,但是受精率低,胚胎发育阻滞率高,囊胚形成率低,这提示体律和改善体外成熟培养环境是当前的主要方向。精、卵浆内单精子注射技术前遗传学诊断技术的成熟标志着人类生殖医学进入了崭新的领域,但同时也不能否认,在这一领域中还存在诸如妊娠率低、药物副作用和多胎率高等问在临床上也暴露出一些问题,如卵巢过度刺激综合征,姆⑸⒅瘟品延酶咭约坝朐镀诜⑸舶┑目赡芄叵档鹊龋岩鹑嗣堑墓刈ⅰB涯赶赴逋獬墒炫嘌际,是近年来研究的热点,它是在自然周期或使用少量约际豕惴河τ玫闹饕U习K裕绦钊肴鲜堵涯赶赴某墒旃卵母细胞在体内的成熟过程是在促性腺激素的作用下在卵泡内完成的。印泡是一个结构和功能单位,其中颗粒细胞是卵泡内主要的体细胞成分,它介、导促性腺激素对卵母细胞的调节,同时通过自分泌或旁分泌作用,维持有促进卵母细胞的完全成熟,尚未见研究报道。琁和种植天津医科大学博士学位论文一~、,
珻是大多数哺乳动物卵母细胞所特有的胞膜下迁移,沿卵膜下呈线状排列,这是目前公认的哺乳动物卵母细胞成熟体外成熟过程中,皮质颗粒和微管是否发生与细胞核成熟同步的变化,关系到卵母细胞成熟后受精及卵裂的能力。目前研究体外成熟卵的皮质颗粒和微管变化的文献所见不多。《熟以及进一步发育潜能的影响,其中在Ⅳ嘌逑抵屑尤肟帕O赴\研究目的:芯砍墒炻雅菽诘奈⒒;芯柯殉部帕O赴ひ骸⒈砥どひ蜃皮质颗粒~种细胞器,在卵母细胞的成熟过程中出现特征性的位置迁移,皮质颗粒向最后阶段的一个共同特征。卵母细胞在成熟和受精过程中,细胞骨架发生~系列明显的变化,微管是一种重要的细胞骨架成分,对于哺乳动物漳赶赴减数分裂的完成、精子的运动、雌雄原核的结合是必不可少的。在卵母细胞本研究分为两部分,第一部分主要在卵巢颗粒细胞原代培养的基础上,研究颗粒细胞的分泌功能以及对分泌功能的影响,其中颗粒细胞的纯度鉴定、颗粒细胞分泌猯和约癎对颗粒细胞功能影响的研究尚未见报道。第二部分研究颗粒细胞生长液等对卵母细胞体外成对卵母细胞体外成熟和发育潜能的影响;云ぶ士帕:臀⒐艿奶卣餍分布研究不同的培养体系和培养时间对卵母细胞核浆成熟协调性的影响。研究方法:梅琶夥ḿ觳邮芴逋馐芫ɑ颊呗雅菀旱拇贫、,利用免疫组化法和—ḿ觳饪帕O赴腇牡鞍妆泶锖蚼谋泶铮ㄌ逋馀嘌颗粒细胞的纯度;芯縁/虶/蕴逋天津医科大学博士学位论文液尚未见文献报道。,和胰岛素样生长因子,⒃型,和睾酮琓乃/琁—.\
培养颗粒细胞分泌、、;例接受治疗患者的段闯墒炻呀粒细胞作用小时后上清液中、.±的含量与对照组无显著差别。ッ靼仔∈驡诼涯赶赴婊殖组进培养体系:对照组/涂帕O赴ひ鹤タ帕O赴ひ,对昆明白小鼠生发泡期卵母细胞进行体外成熟培养;ü逋馐芫ü鄄毂冉细髯樘逋獬墒炻严赴的受精率、卯裂率和囊胚形成率;弥苯用庖哂ü馊旧ê凸簿劢瓜晕⒕,芯扛髯樘逋獬墒炻训钠ぶ体外成熟培养。结果:邮芴逋馐芫ɑ颊叩某墒炻雅菀旱腅、.从卵泡液中分离培养的人卵巢颗粒细胞,%以上呈蛋白阳性表达,杏例扩增出条带。/的蕴逋馀嘌均明显高于空白对照组,//,明显低于对照组,籔、一虴体外成熟培养,榕嘌∈焙蟪墒斓穆严赴宦亚鹣赴春衔琌吐懵训拇笮【直鸫笥谂嘌暗奈闯墒吐懵眩琍.,三组之间无显著性差异。三组体外培养成熟的裸卵与体内成熟卵的大小没有显著性差异。煌嘌奔浜筒煌嘌橹涑现巨大第一极体和胞浆碎片化的卵的比例无显著性差异。哉兆椤⑸ひ,楹涂帕O赴ひ鹤槌墒炫嘌∈钡南赴顺墒炻史直鹞ァ⑸ひ