hdac2磷酸化区域突变体的构建及其对小鼠成纤维细胞增殖的影响.pdf

重庆 医学 年 月第 卷第 期
· 论 著 · ：．／．．—．．．
磷 酸 化 区域 突变 体 的构 建 及 其对 小 鼠成 纤 维细 胞 增 殖 的影 响
肖 勇 ，黄 宏 ，郭 榉 ，邢 伟 ，李 向云 ，袁 培 淞 ，徐 祥△
第三 军 医大 学 附属 大坪 医院野 战 外科 研 究所 ／创 伤 、烧 伤 与复合 伤 国 家重点 实验 室 第一研 究 室 ，重庆
摘 要 目的 应 用 片段 缺 失 突 变技 术 鉴 定 自身磷 酸化 对 其 连 接 酶 活 性 及 蛋 白质 翻 译 的 影 响 。方 法
以 前期 获 得 的 鼠源 性 连 接 酶 结构 域 基 因 片段 为模 板 ，设 计 片 段 缺 失 突 变 引 物 ，经 长 片 段 重 叠延 伸 技 术 扩
增 获得 片段 缺 失 突 变基 因 片段 ，后 于 大肠 杆 菌 中 自然连 接 扩 增 获 得 ．／一连 接 酶 磷 酸 化 结 构域 缺
失突变的真核表达载体 。然后将 载体 转染于 成纤维细胞 瞬时过表 达 突变基 因，再 经翻译 反应性 荧光素 酶报告基 因实验 和
鉴定 自身磷酸化修饰对 —连接酶介 导的报告 基 因和靶 蛋 白质表达 的影响。最后通过 实验检
测 自身磷 酸化修 饰对其 —连接酶介导 的 细 胞增 殖的影 响。结果 成功 构建获 得磷 酸化修 饰 完全缺 失的
片 段 缺 失 突 变体 ．／一—。报 告 基 因检 测 结