生化实验报告1.docx

生化实验报告1.docx南方匡科大
生物化学实验报告
姓 名： 许梨梨
学 号： 3120100024
专业年级： 2013级医学影像学
组 别： 第3实验室
生物化学与分
子生物学实验教学中心
实验名称
氨基酸的薄层层析
实验日期
2014-10-24
实验地点 第3实验室
合作者
许琮
指导老师何肖娟
评分
教师签名
批改日期
—、实验目的
掌握薄层层析法的一般原理。
掌握氨基酸薄层层析法的基本操作技术。
掌握如何根据移动速率（Rf值）来鉴定被分离的物质（即氨基酸混合液）。
二、实验原理
（-）薄层层析法
薄层层析法是色谱分析技术的一种，一般将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为 固定相。当液体（展开溶剂）在固定相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不 一样，不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展 开剂的移动速率也不同，因而能够将样品各组分分离开。即通过吸附-解吸-再吸附-再 解吸的反复进行，而将样品各组分分离开来。
吸附薄层中常用的吸附剂为氧化铝和硅胶。层析用硅胶是一种多孔性物质，它的硅 氧环交链结构表面上密布极性硅醇基，这种极性的硅醇基能和许多化合物形成氢键而产 生吸附。
本实验采用硅胶吸附薄层层析。硅胶吸附薄层层析的特点： 化铝稍弱，其吸附活性也与含水量呈负性相关。，因而，硅胶只 能用于中性、或酸性成分的分离，碱性成分不能用它分离。 105°C-U0°C,不能过高。
（-）氨基酸与前三***的显色反应
前三***水化后生成水化前三***，它与氨基酸发生蔑基反应生成还原荫三***、氨基酸, 与此同时。还原荫三***又与氨基荫三***缩合生成紫红色化合物而使氨基酸斑点显色。
（三）相对迁移率一Rf值的计算
混合氨基酸被分离后在薄层层析图谱上的位置用相对迁移率一Rf值（rate of flow） 来表示。
层析中，物质沿溶剂运动方向迁移的距离与溶液前沿的距离之比为Rf值。
由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的，故移动速率（Rf值）也是恒定的，因 此可以根据Rf值来鉴定被分离的物质。
三、材料与方法：
（-）实验材料
分析样品：（1）混合氨基酸溶液
（2）氨基酸的异丙醇溶液：丙氨酸、精氨酸、甘氨酸。
试剂：（1）吸附剂：硅胶；
（2） 黏合剂：%的，***纤维素钠;
（3） 展层-显色剂：为正丁醇、乙醇、荫三***、***、蒸馅水混合液；
仪器及器材：（1）层析板（5*15cm）； （2）小烧杯及药匙；（3）量筒（10ml）；
（4）小尺子和铅笔；（5）毛细玻璃管；（6）层析缸；（7）烘箱；（8）天平
（-）实验方法
实验流程:
：
四、结果与讨论:
（-）结果
(1)层析时，能清楚地看到展层-显色剂在层析板上运动的痕迹。通过计时及观察 展层剂前沿的位置，可以大致看出展层剂前沿的移动速率随前沿所处高度的增加而减 缓。当前缘到达层析板中间部位时，能观察到展层剂前沿移动的速率变得非常缓慢。
层析过程中层析板上没有显色现