HPLC原理及应用PPT教案.pptx

HPLC原理及应用
实验目的
熟悉HPLC的工作原理
熟悉HPLC在医疗实践中的应用
新药研究
药品生产
TDM
其他测定，如毒物，代谢产物，活性物质
了解HPLC在生物医学科研方面的应用
了解HPLC的操作方法
了解生物样品(血、体液、组织)处理过程
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High Performance Liquid Chromatography，HPLC
Chromatography:最早源于对植物色素物质的提取，呈现不同颜色的谱带，故叫色谱。
流动相
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色谱的分类1
根据流动相
以气体作流动相—气相色谱(Gas Chromatography,GC)
固定相为液体 气-液色谱
固定相为固体 气-固色谱
以液体作流动相—液相色谱(Liquid Chromatography,LC)
固定相为液体 液-液色谱
固定相为固体 液-固色谱
超临界色谱——流动相是在接近它的临界温度和压力下工作的液体
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色谱的分类2
根据固定相的附着方式
柱色谱—固定相装在圆柱管中
平板色谱
薄膜色谱—固定相涂敷在玻璃或金属板上
纸色谱—液体固定相涂在纸上
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色谱的分类3
根据极性
反相色谱—流动相极性＞固定相极性
正相色谱—流动相极性＜固定相极性
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色谱的分类4
根据分离机理
分配色谱—样品组分的分配系数不同
吸附色谱— 样品组分对固定相表面吸附力不同
体积排阻色谱—利用固定相孔径不同，把样品组分按分子大小分开
离子交换色谱—不同离子与固定相内相反电荷间的作用力大小不同
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基本原理
用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相(mobile phase，即两相中移动的一相)泵入装有固定相(stationary phase，即两相中固定不动的一相)的色谱柱,经进样阀注入供试品,由流动相带入柱内,由于溶于流动相中的各组分经过固定相时与固定相发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，不同的物质顺序离开色谱柱,从而先后从固定相中流出。在柱内各成分被分离后,通过检测器得到不同的峰信号，最后通过分析比对这些信号来判断待侧物所含有的物质。
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基本概念
1. 色谱图(chromatogram)——样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号-时间曲线，又称色谱流出曲线(elution profile) 。
2. 基线(base line)——流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴。
3. 色谱峰(peak)——组分流经检测器时相应的连续信号产生的曲线。流出曲线上的突起部分。正常色谱峰近似于对称性正态分布曲线(高斯Gauss曲线) 。不对称色谱峰有两种：前延峰(leading peak) 和拖尾峰(tailing peak)。前者少见。
4. 保留时间(retention time,tR)——从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。
5. 峰底(peak base)——基线上峰的起点至终点的距离。
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