免疫学论文.doc

免疫学实验论文
题目:间接ELISA法测定抗原免疫动物体内的抗体效价
姓名:詹峥学号:20**********
专业:生物科学1102
指导教师:祁高富职称:副教授
中国·武汉
二0一三年十一月
间接ELISA法测定抗原免疫动物体内的抗体效价
摘要:间接ELISA法测定抗原免疫动物体内的抗体效价,是免疫学中经典的抗原-抗体实验。用已知抗原注射兔或小鼠,一段时间后抽取被免疫动物的血液,分离出抗血清。再运用间接ELISA法,用同种已知抗原包被酶标板,洗脱后用脱脂牛奶封闭,加入一抗;洗脱后加入酶标二抗;再次洗脱后加入分离出的抗血清;显色后测定其吸光度,与阴性组对照即可测得抗体效价。此种方法能够快速并且准确地测定未知抗体的效价,因而得到了更为广泛的应用。
关键词:抗原: 抗体: 间接ELISA: 效价
前言:利用抗原与抗体特异性反应的特性对抗原或抗体进行量或质的测定分析,是最经典的血清学方法,这类分析方法不断改进从而具有特异、灵敏和快速的特点。为了得到高效价抗体从而更加便捷地进行各项试验,准确测定未知抗体的效价便成为了亟待解决的问题。本文将从抗原注射、抗血清获得、抗体效价测定等方面展开叙述,并就实验中所出现的问题进行论述。
抗原注射
给实验动物注射抗原从而使动物体产生抗血清是本次实验的第一步。用具有抗原性的物质注入到健康动物的机体后,将引起免疫应答,并会形成浆细胞,分泌抗体。抗体主要存在于血清中,经多次免疫,使血清中的抗体量达到要求浓度,然后采集动物血液,再从血液中分离析出血清,从而获得抗血清。对实验动物的选择也有一定的要求,常用的免疫动物有家兔、羊、马、大鼠、小鼠、豚鼠等。免疫用动物应选适龄、健壮,最好为雄性。家兔一般选择选择年龄在6个月以上当年繁殖的♂性,体重2~3公斤,免疫前用金属编号牌固定兔耳,或用染料涂沫在动物的背部,作出明确的标记。在对实验动物进行免疫时,免疫原所用剂量需要控制,合成免疫原为2mg(半抗原约为20~200 μg)。家兔为300~600 μg/次,每次不超过2mL;小鼠为10~100 μg /次(10-20,20~40 μg / ml),。
免疫的途径可以分为:皮下注射、肌肉注射、静脉注射等。对于免疫时间的间隔,可溶性抗原首次免疫10天后进行二次免疫,颗粒性抗原可1~2周每次。
本次实验分为四组,每组4只小鼠1只兔子,将每组小鼠编号1、2、3、4,将兔子也编号1、2、3、4;小鼠的注射方法为尾静脉注射或腹腔注射,1、3号作为实验组注射抗原牛血清白蛋白(BSA)50μg,2、4号作为对照组,注射等量生理盐水50μg;兔子的注射方法为肌肉注射或耳静脉注射,1、3组作为实验组注射抗原400μg,2、4组作为对照组注射等量生理盐水400μg。
2. 抗血清获得
将实验动物免疫过后,获得抗血清即为实验的第二步。要得到血清便需要对实验动物进行血液获取。,将实验小白鼠放入有孔离心管,并使其尾巴露出孔外之后,通过断尾的方法,用手术剪间断小鼠尾巴末端,从尾根部朝下轻轻捋过整条尾巴,;实验兔子取血方法耳静脉抽学法,用酒精对实验兔子耳部消毒处理之后,用医用注射器从兔耳远心端向近心端扎入,每次抽取10ml血液。将所取得