纤维蛋白原测定.ppt

纤维蛋白原测定 Fibrinogen
PT-der与Clauss的选择
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纤维蛋白原（Human Fibrinogen ）一种由肝脏合成的具有凝血功能的蛋白质，是纤维蛋白的前体。分子量340，000，半衰期4～6日。血浆中参考值2～4克/升。纤维蛋白原由α、β、γ三对不同多肽链所组成，多肽链间以二硫键相连。
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在凝血酶作用下，α链与β链分别释放出A肽与B肽，生成纤维蛋白单体。在此过程中，由于释放了酸性多肽，负电性降低，单体易于聚合成纤维蛋白多聚体。但此时单体之间借氢键与疏水键相连，尚可溶于稀酸和尿素溶液中。进一步在Ca+2与活化的ⅩⅢ因子作用下，单体之间以共价键相连，则变成稳定的不溶性纤维蛋白凝块，完成凝血过程。肝功能严重障碍或先天性缺乏，均可使血浆纤维蛋白原浓度下降，严重时可有出血倾向 。
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血浆纤维蛋白原水平的变化与凝血障碍、出血、DIC、应激（因为它也是一种急性期蛋白）有关，而且由于不断有文献报道它与冠心病，心肌梗塞也有关系，因此临床上越发受到重视。不仅工作量增大而且对方法准确性的要求也越来越高。但至今WHO（世界卫生组织）、ICSH（国际血液学标准委员会）仍未明确提出一个纤维蛋白原的标准化或推荐方法，供临床常规使用。
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现有的方法大体上分三大类：
（1）物理化学测定法；
（2）免疫学测定法；
（3）基于凝血酶的作用，形成纤维蛋白的方法。
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（1）物理化学测定法：这类方法又可分为盐析法（包括用亚硫酸钠、硫酸铵或***化钠盐析，用蛋白质显色或比浊法测定），热变性沉淀法和电泳法等几种。这类方法都比较简单、快速，尤其适于急诊检验，但缺点是本法的特异性不强。所测的不是有凝固功能的纤维蛋白原，可能包括部分的降解产物和/或其它蛋白。而电泳法又太繁琐，不适于常规工作。
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（2）免疫学测定法：将纯纤维蛋白原作为抗原免疫动物，制成多克隆或单克隆抗体。然后用免疫胶乳、被动血凝或反向血凝、单向免疫扩散、火箭电泳以及ELISA等方法测定。优点是大部分方法简便，但缺点是所测的不仅是可凝固的纤维蛋白原，可能包括了它的降解产物（因为它们有共同抗原），也可能包括了障碍性纤维蛋白原（dysfibrinogens即N端谷氨酸γ位未羧化的无功能的纤维蛋白原,又称缺维生素K引起的蛋白质，PIVKA）。但免疫法也有一个好处，就是可用来测定PIVKA。如果一个患者总纤维蛋白原（用免疫学测定结果）不低，甚至增高，而功能性（即可凝固性）纤维蛋白原却明显减少，即可判断为存在PIVKA。肝病、维生素K缺乏等均可导致PIVKA升高，有临床诊断价值。总的说来，免疫学方法用于临床常规实验室仍存在一定问题。
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（3）基于凝血酶的作用，形成纤维蛋白的方法：
凝血酶凝固法 （Clauss法） ，将凝血酶加到血浆中，使纤维蛋白原变成纤维蛋白，使出现凝固。在有足量的凝血酶时，与不同含量的纤维蛋白原作用，其出现凝固的时间与纤维蛋白原含量呈负相关。 本法的干扰因素主要是肝素。在高浓度时可造成假的低值（可通过加入硫酸鱼精蛋白而消除）。
克劳斯法 （ Clauss法） 是美国国家临床检验标准委员会 （NCCLS） 推荐的纤维蛋白原常规测定方法。
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现在的全自动凝血分析仪大部分在测PT时往往能够同时报告纤维蛋白原。其原理和理论根据是：当PT测定完成时，全部纤维蛋白原均变成纤维蛋白（相当于Clauss法血浆中加入了凝血酶），其形成的浊度与纤维蛋白的含量成正比。因此，不需另加任何试剂，即可由浊度直接推算出纤维蛋白原的含量。故本法又称为PT导出（或衍生）纤维蛋白原测定法，简称PT-Der法。 由于此法使用的是比浊法，因此受到测定杯透光性能与血浆状态的影响比较大，对于溶血，黄疸，乳糜的标本，此方法会出现较大的结果偏差。
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我们科室现在使用的SYSMEX-CA1500全自动凝血仪与贝克曼 ALC-ELITE-PRO全自动凝血仪都可以同时用Clauss法与PT-Der法对FIB进行测定。其中贝克曼 的仪器可以在定标PT的同时自动得到PT-Der法测定FIB的比浊曲线，而SYSMEX的仪器则必须定标PT后使用仪器测出标准品各种浓度下的OD值与Clauss法测出的FIB值，然后自行设定曲线对应关系。
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