免疫学基础：第九章 ABO血型鉴定及HBSAg测定.ppt

ABO血型鉴定及HBSAg测定
凝集反应
【实验目的】
　　1．了解凝集反应的原理、基本类型及其临床意义。
　　2．掌握玻片凝集实验、间接凝集实验的实验方法和结果分析。
【概述】
在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。凝集反应是一种定性的检测方法，也可以进行半定量检测。凝集反应可分为直接凝集反应和间接凝集反应。由于凝集反应方法简便，目前在临床检验中仍被广泛应用。
一、直接凝集反应
　　细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应 。常用的凝集试验有玻片法和试管法两种。
玻片凝集试验——ABO血型鉴定
　　玻片凝集试验为定性试验，一般用已知抗体作为诊断血清，与受检颗粒抗原，如菌液或红细胞抗原各加一滴在玻片上，混匀，数分钟后即可用肉眼观察凝集结果，出现凝集颗粒的为阳性。此法简便，快速，适用于从病人标本中分离得到的菌种的诊断或分型，也可用于红细胞ABO血型的鉴定。
【实验原理】
　　人类ABO血型抗原主要有A和B两种，根据红细胞表面这两种抗原的有无可把血型分为四种。据此，将抗A和抗B抗体分别与待测红细胞混合，抗A或（和）抗B抗体与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集，据其凝集情况便可判定出受试者的血型。
　　　　　　ABO血型的划分
红细胞表面Ag
血清中Ab
A型
A
抗B
B型
B
抗A
AB型
A、B
—、—
O型
—、—
抗A、抗B
【实验材料】
　　1．ABO血型鉴定试剂盒　内含抗A分型试剂和抗B分型试剂各1支。
　　2．一次性采血针1枚、洁净玻片2块、75％酒精、灭菌棉签。
　　3．84消毒液
3．用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。用另一载玻片一端取适量血液加入抗A分型试剂，并混匀；用另一端再取适量血液加入抗B分型试剂，并混匀。用干棉签止血。
　　4．观察红细胞有无凝集发生。如有凝集，可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分散。判定结果后把玻片放入消毒液中。
A
B
【实验方法】
　　1．取洁净载玻片1块，并标记（如图）
2．将抗A、B分型试剂分别加
1滴于标记有A、B的玻片两侧。
抗A
抗B
抗A分型试剂侧
抗B分型试剂侧
血型
+
—
A
—
+
B
+
+
AB
—
—
O
“＋”表示红细胞凝集，“－”表示红细胞未凝集
【实验结果】
　　记录受检者红细胞凝集情况，根据ABO血型鉴定表(下表)，判断受检者的血型。
　　　ABO血型鉴定表
二、间接凝集反应
　　将可溶性抗原或抗体先吸附于适当大小的颗粒性载体表面（这种载体与免疫无关），然后与相应抗体或抗原结合，在适量的电解质存在下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应。
　　根据载体的不同可将间接凝集反应分为：间接血细胞凝集试验、间接乳胶凝集试验（及间接乳胶凝集抑制试验）和金黄色葡萄球菌协同凝集试验等。
间接凝集抑制试验——妊娠试验
【实验原理】
　　可溶性抗原致敏的乳胶颗粒与相应抗体作用可使乳胶颗粒凝集，此为间接乳胶凝集试验。若使抗体先与可溶性抗原作用，再加入该抗原致敏的乳胶颗粒，则乳胶凝集被抑制，此为间接乳胶凝集抑制试验。
　　孕妇尿中绒毛膜促性腺激素（HCG）含量明显增高。HCG与抗HCG抗体先作用后，再加入HCG致敏的乳胶颗粒，不出现凝集反应，此为妊娠试验阳性；非孕妇尿中HCG含量不足以消耗掉抗HCG抗体，抗体与后加入的HCG致敏乳胶结合呈现凝集现象，则妊娠试验阴性。