两种不同分离、纯化方法对sd大鼠bmscs生物学特性影响研究.pdf

两种不同分离、纯化方法对４笫驤窱蔍岈生物学特性影响的研究外科学中文摘要研究生：张志逖导师：李忠民教授专业：神经元细胞、神经胶质细胞，体外实验已证实在一定的诱导条件下蛏窬细胞、神经胶质细胞转化，可不同程度的改善颅脑损伤、脑卒中等疾病的神经功能的分重要的临床应用价值与前景。本研究目的就是探讨通过比较观察使用①密度梯度离心提取ヅＱG逄谂嘌á谌ü撬杼ヅＱG逄谂嘌ㄕ饬街址椒ㄌ崛　⑴嘌鳶在无菌的条件下用密度梯度离心法与全骨髓分别提取芰涞腟笫蟮淖蟆目的骨髓间充质干细胞且恢执嬖诠撬柚校丛从谥信卟悖揖哂卸嘞分化潜力的成体干细胞。在特定的诱导条件下可以向中胚层来源的各种细胞，如成骨细胞、脂肪细胞、肌细胞分化。近年来随着对纳钊胙芯浚⑾諦也具有跨胚层分化的潜能，浦踩牖钐宓闹惺嗌窬低衬诳梢源婊畈⒖煞只缺损状态。因此，且恢质掷硐氲囊浦仓瘟粕窬低臣膊〉南赴哂惺大鼠的骨髓间充质干细胞的细胞形态、生物学特性、细胞表型等生长增殖和生物活性各方面有无差异，从而评价两种方法的优势与劣势，以期待寻找一种更好的提取、培养骨髓间充质干细胞的方法。方法右下肢的潭煤ヌヅＱG宓腖瓺低糖嘌┰Ｓ妹芏忍荻壤胄奶崛〕龅脑鶥再经胎牛血清贴壁培养法传代后可得到较纯化的可大量扩增的赴得到的细胞为；无菌条件下取全骨髓在胎牛血清中贴壁培养后经换液、传代也可得到大量的得到的细胞为组Ａ魇较赴羌觳饷芏忍荻壤胄姆ㄓ肴ü撬枇街址椒ㄌ崛∨嘌南赴腃，珻５谋泶铮ㄋ嘌腂，绘制纳で撸⒈冉狭组南赴翁⒍炒娓此誃后存活率和生长状态等。。．
的鲋乘俣冉显嘌隹欤谌腂已基本纯化，ü撬璺ㄓ朊芏忍荻壤胄奶崛》ㄏ啾炔僮骷虻ィǚ呀闲。芏忍荻壤胄奶结果瓵组与榈腂生物性状皆较稳定，初培养时细胞皆为圆形，传代稳定后细胞呈湫偷乃笮危⒁凿鑫凶磁帕谐沙ぃ挥械湫偷奶卣餍缘奶谏ぃ魇较赴羌觳釧组与榈腂细胞表面标记物：＃结果镃，。，‘；镃，‘，。，均符合奶卣鳎瓵组与锽均贴壁生长，原代台盼蓝染色检测细胞活性閤为ィ诜ィ⑹褂猛臣蒲砑进行统计学分析，差异存在统计学意义；瓵组细胞生长特性：谏ぃ嘌鴏齑锏ト诤希ù实湫偷乃笮危凶磁帕猩ぃ孀糯ù赴鲋撤只芰跞酰築组细胞不同于樵谟冢篜赴Hü撬柘赴灰海ù淌谴蠓却炕闹饕方法，第四代细胞镜下观察才可达到基本纯化，但得到的细胞的活性却强于组。结论密度梯度离心提取和全骨髓胎牛血清贴壁培养这两种方法提取、培养的细胞经流式细胞仪进行表面标志物鉴定符合奶卣鳎换竦玫腂纯度较高，在显微镜下观察两组男翁吧ぷ刺嗨疲芏忍荻壤胄奶崛〖涑渲矢上赴赴盍Φ陀谌ü撬璺存在统计学差异这种差异可能与过程中的多次离心及洗涤对细胞造成丢失及损伤等原因有关；取法适于短时间内要求得到纯度较高的间充质干细胞细胞。关键词骨髓；间充质千细胞；细胞提取；细胞培养．
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凇符号说明黜英文缩写英文全称中文全称骨髓间充质干细胞干细胞胚胎干细胞胎牛血清低糖培养基杜氏磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液二***亚砜成体干细胞分钟天转种单克隆抗体大鼠青链霉素碱性磷酸酶骨髓分化抗原簇聚乙烯吡咯烷***透射电镜成纤维细胞集落神经生长因子睫状神经营养因子小时籑狿疭瓼’疭
在由以药物为主的治疗逐渐向细胞治疗转变。自年拢拦箍敌谴笱和约翰霍普金斯大学学研究所首次在动物身上证实“治疗性克隆”技术是可行的，借助克隆技术成功对实验有广阔的实验研究及应用前景，成为科学家们研究的热点。在生物体中，不仅具有自我更新能力夷芄桓叨确只叨三种类型：①全能干细胞梢苑只纬缮锾宓多种细胞，并进一步形成机体的任何组织或器官，刖二十一世纪随着科学技术及经济的高速发展，人类认识世界、改造世界的能力也在发生变化。在自然科学及医疗卫生领域，对人类疾病的治疗在发生一次巨大的革命，的汤姆生教授募6亟淌直鹪和拦蒲г郝畚募飞媳ǖ懒怂怯貌煌椒ɑ竦昧司哂形尴拊鲋澈腿芊只力的人胚胎干细胞，赴，这引起了国际医学界的科学家对干细胞的关注，引发了全球研究干细胞的热潮【浚笱芯咳嗽甭叫瓿闪细胞的体外分离、纯化、扩增和鉴别等研究，年拢拦程睾诘律镆鼠进行了胚胎干细胞治疗上赴挠猛究缮婕暗揭窖Ы绲亩喔隽煊颍脐带血干细胞移植，骨髓造血干细胞移植等关于干细胞技术临床应用的一些基础及应用基础研究，科学家们成功地运用于血液病、各种恶性肿瘤放射或化疗后的血液及免疫功能障碍的治疗，并且有望应用干细胞治疗心肌梗死、糖尿病等代谢性疾病及老年性痴呆、中枢神经系统的神经功能障碍等疾病，于细胞作为一种极为理想的移植种子细胞，具增殖的原始细胞为干细胞。根据分化潜能的大小，干细胞大致可分为琓：此类干细胞具有形成完整个体的分化能力，因为细胞能在体外合适的培养液中无限制地扩增，有与早期胚胎细胞相似的形态特