金黄色葡萄球菌检测.doc

金黄色葡萄球菌检测 1 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下: : 36℃±1℃。 : 2℃~5℃。 : 37℃~65℃。 :感量 。 。 。 : 1ml (具 刻度)、 10ml (具 刻度)或微量移液器及吸头。 :容量 100ml 、 500ml 。 :直径 90mm 。 注射器: 。 pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸。 2 培养基和试剂 Baird-Parker 琼脂平板:见附录中 1。 (BHI) :见附录中 2。 :见附录中 3。 :见附录中 4。 :见附录中 5。 3 操作步骤 固体和半固体样品称取 25g 样品置盛有 225ml 生理盐水的无菌均质杯内, 8000 r/min ~10000 r/min 均质 1min ~ 2min ,或置盛有 225ml 稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打 1min ~ 2min ,制成 1:10的样品匀液。 液体样品以无菌吸管吸取 25ml 样品置盛有 225ml 生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成 1:10的样品匀液。 用 1ml 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10样品匀液 1ml ,沿管壁缓慢注于盛有 9ml 稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用 1支 1ml 无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成 1:100 的样品匀液。 操作程序,制备 10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用一次 1ml 无菌吸管或吸头。 ,选择 2个~ 3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行 10倍递增稀释时,每个稀释度分别吸取 1ml 样品匀液以 、 、0. 4ml 接种量分别加入三块 Baird-Parker 平板,然后用无菌 L棒涂布整个平板,注意不要触及平板边缘。使用前,如 Baird-Parker 平板表面有水珠, 可放在 25℃~50℃的培养箱里干燥,直到平板表面的水珠消失。 ,涂布后,将平板静置 10min ,如样液不易吸收,可将平板放在培养箱 36℃±1℃培养 1h;等样品匀液吸收后翻转平皿,倒置于培养箱, 36℃± 1℃培养, 45h ~48h 。 金黄色葡萄球菌在 Baird-Parker 平板上,菌落直径为 2mm ~ 3mm ,颜色呈灰色到黑色,边缘为淡色,周围为一混浊带,在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度,偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落;但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些,外观可能粗糙并干燥。 选择有典型的金黄色葡萄球菌菌落的平板,且同一稀释度 3个平板所有菌落数合计在 20CFU ~200 CFU 之间的平板,计数典