3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定还原糖.doc

实用标准文案
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3,5-二硝基水杨酸比色法
---- 标准曲线的制作
1. 实验原理
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。 还原糖是指含有自由醛基或***基的 糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖 10257 RP麦芽
糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物， 3,5-二硝基水杨酸则被
还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物 质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在 540nm波长下测定光密度值， 查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。 由于多糖水解为单
HI
糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以 。
加热
+ 还原椭 •
碱性
2. 实验材料、主要仪器和试剂

主要用到这些实验材料：红曲黄色素发酵液、钠虑膜浓缩后红曲黄色素液、
旋转蒸发后红曲黄色素液。

本实验用到的实验仪器有：
1） 具塞玻璃刻度比色管：25mD19;
2） 烧杯：100mD4;
3） 三角瓶：100mD1;
4） 容量瓶：100mD3, 50mD3;
5） 刻度吸管：1mD4; 2mD3; 10mD1;
6） 沸水浴；
7） 冰浴；
8） 扭力天平；
9） UV —2802SH型紫外可见分光光度计 尤尼柯（上海）仪器有限公司;

1） 1mg/mL葡萄糖标准液
准确称取80E烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg,置于小烧杯中，加少量 蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL,混匀，4C 冰箱中保存备用。
2） 3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂
DNS和262mL 2M NaOH溶液，加到500mL含有185g酒石酸钾 钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏 水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。
3. 实验步骤 制作葡萄糖标准曲线
取7支25mL具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL的葡萄糖
标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应 液。
表1葡萄糖标准曲线制作
管号
1mg/mL葡萄糖标准液
（mL）
蒸馏水
（mL）
DNS
（mL）
葡萄糖含量
（mg）
光密度值
（OD540nm）
0
0
2

0
1




2




3




4




5




6




将各管摇匀，在沸水浴中准确加热 5min，取出，冰浴冷却至室温，用蒸馏水
定容至25mL，加塞后颠倒混匀，在分光光度计上进行比色。调波长 540nm，用 0号管调